稳定表达αvβ3细胞系的建立及其对口蹄疫病毒易感性的评价

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1、密级：论文编号:中囯农业科学院学位论文稳定表达avp3细胞系的建立及其对口蹄疫病毒易感性的评价EstablishmentofaStableavp3-ExpressingCellLineandEvaluationofItsSusceptibilitytoFoot-and-MouthDiseaseVirus硕士研究生：张伟指导教师：郑海学研究员申请学位类别：农学硕士专业：丽兽医学研究方向：动物傲織S原学糊^行病学培养单位：兰州兽医研究所研究生院2015年5月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。職所知，i了文中特别加以标注和致谢的

2、地力外，论文中不包含其他人已经发誠腦励職錄，也不健減得巾_麵報或其它教龍构的学位或证価賴过酣料。与我-同工作_规本研前?做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名:时间：々jr年右月//日关于论文使腦权的声明本人完全了解中国农业科学院有关保留、使用学位论文的规定，即：中国农业科学院梳關敍论文隨_麵盘，允職文誠_■，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中隊业科学院可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。研究生签名:时间：M年《月/j/日年r月导师签名:时间:中国农Ik科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表

3、论文题目稳定表达avp3细胞系的建立及其对口蹄疫病毒易感性的评价研究动物传染病病原论文作者张伟专业预防兽医学培养单位（研宄所)兰州兽医研究所指导教师郑海学姓名职称硕（博）单位专业签名评硕导q甘肃农业大学动物医胡永浩教授预防兽医学博导W学院阅硕导口刘思国研宄员哈尔滨兽医研宄所预防兽医学人博导V答辩主席0硕导口甘肃农业大学动物医教授预防兽医学博导泣7学院硕导口甘肃农业大学动物医吴润教授预防兽医学博导V学院/Jin答硕导口中国农业科学院兰州马军武研宄员预防兽医学博导V兽医研宄所辩副研宄硕导137中国农业科学院兰州孙世琪预防兽医学员博导口兽医研究所liA委硕导&^中国农业科学院

4、兰州郭慧琛研宄员预防兽医学博导口兽医研究所员副研究硕导w中国农业科学院兰州张克山预防兽医学会议记录（秘书）(1以樣论文答辩时间地点2015年5月15日兰州兽医研宄所综合楼六楼会议室Secrecy:No.ChineseAcademyofAgriculturalSciencesDissertationEstablishmentofaStableαvβ3-ExpressingCellLineandEvaluationofItsSusceptibilitytoFoot-and-MouthDiseaseVirusM.S.Candidate：ZhangWeiSupervisor：P

5、rofessorZhengHaixueMajor：PreventiveVeterinaryMedicineSpecialty:EtiologyandEpidemiologyMay2015摘要口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV）是单股正链RNA病毒，属于微RNA病毒科口蹄疫病毒属成员，FMDV对偶蹄动物高度致病，包括牛、水牛、猪、山羊、绵羊及多种野生物种。病毒识别受体是病毒感染的第一步，决定着病毒感染细胞的类型和宿主嗜性。FMDV可以识别不同受体，然后介导不同的路径进入细胞。FMDV通过识别位点RGD结合整联蛋白受体（αvβ1、αv

6、β3、αvβ6和αvβ8）后，通过网格蛋白介导的内吞路径进入细胞；FMDV还可以同VP3第56位精氨酸（VP3056R）结合硫酸乙酰肝素受体，通过小窝蛋白介导的内吞路径进入细胞。整联蛋白受体除了介导病毒感染作用外，还具有介导或激发信号转导等多种作用，这些功能参与病毒的致病机制还不清楚。因此，本研究为了揭示单个受体对病毒感染和信号介导的作用，构建单个受体细胞系，为进一步深入研究奠定基础。本研究克隆了整联蛋白受体αvβ3基因，并构建了稳定表达αvβ3的CHO-677-αvβ3细胞系，并评价了对口蹄疫病毒的易感性，具体内容如下：（1）αv和β3亚基的克隆：从乳鼠肺组织中分别提

7、取了整联蛋白受体αv和β3亚基基因组总RNA，根据GenBank中已公布的整联蛋白αv和β3亚基基因序列，分别设计合成两对特异性引物，RT-PCR扩增出鼠源整联蛋白αv和β3亚基基因，产物经胶回收纯化后分别与pGEM-T载体相连，构建重组质粒，并进行多序列比对分析。结果表明，鼠源整联蛋白αv亚基基因全长3135bp，编码1045个氨基酸，β3亚基基因全长2364bp，编码788个氨基酸。序列同源性比较发现，鼠源αv亚基基因与人、猪同源性较高，而β3亚基基因与牛和绵羊的同源性较高。（2）αv和β3蛋白表达及其多抗的制备：将扩增的αv和β3部