间充质干细胞定向诱导为内皮细胞体外探究.doc

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1、间充质干细胞定向诱导为内皮细胞体外探作者：杨思远，赁可，石应康，陈焕文，蒙炜【摘要】目的：为寻找心血管组织工程新的种子细胞来源，探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的体外培养方法和向血管内皮细胞分化的能力。方法：利用淋巴细胞分离液分离出MSCs,并体外扩增，激光共聚焦显微镜检测表面抗原表达，以含血管内皮细胞生长因子（VEGF）、碱性成纤维生长因子（bFGF）的诱导分化培养液定向诱导传代使其向血管内皮细胞方向分化，观察细胞形态的变化，检测内皮细胞特异性标志物的表达。结果：MSCs在体外传代扩增后激光

2、共聚焦显微镜检测结果显示CD44、CD90表达阳性，CD31、CD45为阴性，分化后细胞具有内皮细胞的形态学特征，并表达内皮细胞特异性标志物CD31O结论：骨髓间充质干细胞可在体外诱导向内皮细胞方向分化。【关键词】骨髓；干细胞移植；大鼠Spragua-Dawley；间充质干细胞；诱导分化；内皮细胞[Abstract]Objective：Toexploremethodsofseparatingandculturingmesenchymalstemcells(MSCs)ofratsinvitroand

3、tostudythedifferentiationcapabilityofbonemarrowMSCsintoendothelialcells,soastoprovidenewsourceofseedcellsfortissueengineering.Methods：MSCswereseparatedfrombonemarrowwithdensitygradientcentrifugationandwallstiekingscreening,andamplifiedinvitro.Thesurfa

4、ceantigensofMSCswereevaluatedwithconfocedlaserscanningmicroscope(CLSM).ThepassagecellswereinducedbydifferentiationinduationmediacontainingVEGFandbFGFtodifferentiateintoendothelialcells・Themorphologicalchangesofdifferentiatedcellswereobserved,andtheirs

5、pecificindicatorofendothelialcellswasdetected.ResuIts：AfterMSCsbeingpropagatedandamplifiedinvitro,CD44andCD90werepositivelyexpressedinthem,whileexpressionofCD31orCD45wasnegative.Thedifferentiatedcellsdemonstratedthecharacterofendothelialcellsunderphas

6、econtrastmicroscope・Theexpressionofendothelialcellspecificindicator,CD31,wasdetectedatthesametime.Conclusion：Bonemarrowmesenchymalstemcellscanbeinducedintoendothelialcelllineinvitro.[Keywords]bonemarrow；stemcelltransplantation；rats,Sprague-Dawley；mese

7、nchymalcell；induceddifferentiation；endothelialcell在治疗严重慢性缺血性疾病过程中，目前临床常规治疗方法常常无能为力，不能很好地解除患者的痛苦。自1999年以来，有学者提出了治疗性血管新生(therapeuticangiogenesis)的概念，即将外源性血管新生诱导因子转入缺血组织中促进其血管新生和侧支血管形成，包括血管生成(angiogenesis)和血管发生(vasculogenesis)[1]。目前，治疗性血管新生已经发展成为一种治疗缺血性疾

8、病的新方法，其中干细胞扮演了重要的角色。骨髓间充质干细胞(Mesenchymalstemcells,MSCs)自1966年Friedenstein[2,3]等人发现以来，多年研究结果表明，MSCs在体外能自我复制、多系分化，具有强大的增殖能力，可分化为骨、软骨、脂肪、韧带等多种间叶组织，可进行相应的组织修复。但目前关于MSCs是否能分化为成熟内皮细胞，研究尚不多见。故拟通过体外培养成年大鼠MSCs,并将其向血管内皮细胞方向诱导，使所得细胞具有内皮细胞特性，旨在为临床上骨髓间充质干细