大鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化角膜内皮细胞可行性的研究

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1、中图分类号密级大鼠骨髓间充质千细胞体外定向诱导分化角膜内皮细胞可行性的研究ThefeasibilitystudyoftheratbonemarrowmesenchymalstemcellsdirectionaldifferentiateintoCOlTlealendothelialcellinvitro计：学位论文：36页表格：0个插图：12幅指导教师：马翔教授申请学位级别：硕士学位马俊龙学科(专业)：眼科学培养单位：大连医科大学附属第一医院完成时间：二。一三年五月答辩委员会主席：附件1：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本

2、人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。1学位论文作者签名：翌熊关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关

3、数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位’论文属于(请在以下相应方框内打“√，，)：1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密彰～作者签名：导师签名：弓陋日期例；年厂月寥19日期吵吗年n加目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l(二)英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯5(二)材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61．材料····⋯⋯·⋯·······⋯⋯⋯······⋯⋯··⋯⋯········⋯····⋯·62．方法·⋯⋯⋯⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯····⋯⋯⋯⋯8(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．大鼠MSCs细胞形态学⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．大鼠MSCs细胞生长曲线图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133．大鼠MSCs细胞表面标记物检测结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯134．诱导分化后MSCs细胞形态学变化及相关检测⋯⋯⋯⋯1

5、4(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17(五)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(六)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23三、文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(一)综述正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯26(二)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33四、致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36大连医科大学硕士学位论文大鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化角膜内皮细胞可行性的研究硕士生姓名：马俊龙指导

6、教师：马翔教授专业名称：眼科学摘要目的：通过体外培养的方法，培养大鼠骨髓间充质干细胞(ratbonemarrowmesenchymalstemcells，rBMSCs)，掌握其细胞的生长特性，并利用体外定向诱导大鼠骨髓间充质干细胞向角膜内皮细胞分化，检测神经元特性烯醇化酶(neuronspecificenolase，NSE)、Na+．K+．ATP酶活性蛋白的表达，检测对流式抗体CD31和CD34的表达，探讨大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养向角膜内皮样细胞分化的可行性。方法：1．选取大连医科大学动物实验室的SD大鼠，利用Perco

7、ll分离液分离出rBMSCs并体外培养、扩增，观察其形态，通过流式细胞仪检测CD29、CDl05、CD44、CD34抗体对rBMSCs进行鉴定。2．将rBMSCs按照2×105／ml密度种植在12孔板内，分诱导组和空白对照组进行对比培养，3d后铺满瓶底约80％左右，将含有表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)10ng／ml、成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)30ng／ml等诱导剂加入到培养基中进行诱导分化培养，2d换一次液，诱导周期为3周。3．3周

8、后利用免疫荧光法检测诱导后rBMSCs的N矿．10．ATP酶的活性表达，免疫组化检测方法检测NSE的表达，流式细胞仪检测内皮细胞标志物CD3l、CD34的表达。结果：1．分离后的rBMSCs呈漩涡状排列，中央细胞呈三角形及短梭形；流式细胞仪检测结果显示，其表面抗原CD29、C