DNA粗提取与鉴定实验.ppt

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1、DNA粗提取与鉴定实验内容课题分析1实验操作原理5材料器具3实验理论基础4教学建议2实验步骤6一、课题分析1.教学目标（1）分析DNA的性质及提取的基本思路。（2）探究不同手段提取DNA的实验过程。（3）掌握DNA提取的过程并灵活运用。2.背景描述生物体的性状之所以能够遗传给后代，是由于其体内具有DNA或RNA这些遗传物质，DNA是遗传物质已经通过实验证实。那么DNA究竟什么样？本课题通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的理化性质，理解DNA提取以及鉴定的原理，在一定层面感性认知DNA。一、课题分析DNA脱氧核苷酸腺嘌呤一、课题分析dAMPd

2、TMPdCMPdGMP胸腺嘧啶腺嘌呤鸟嘌呤核苷酸结构一、课题分析脱氧核糖（五碳糖）与磷酸分子借由酯键相连，组成其长链骨架，排列在外侧，四种碱基排列在内侧。每个糖分子都与四种碱基里的其中一种相连，这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序列，可组成遗传密码，指导蛋白质的合成。一、课题分析读取密码的过程称为转录。是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA（信使RNA）的核酸分子。多数RNA带有合成蛋白质的讯息，另有一些本身就拥有特殊功能，例如rRNA、snRNA与siRNA。一、课题分析在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。人正

3、常的人体细胞中含有46条染色体。染色体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制，细胞分裂间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。一、课题分析DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，利用这一特性，可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时，吸光度升高，称为增色效应；当变性核酸重新复性时，吸光度又会恢复到原来的水平。较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断裂，双螺旋结构解开—也称为DNA的解螺旋。洋

4、葱内表皮细胞DNA被甲基绿染成绿色，RNA被派洛宁染成红色二、教学建议科学的探究一般过程为“发现问题—提出假设—设计实验—预测结果—得出结论”。通过本实验的设计的具体的实施，是学员能够接受科学的训练，在训练过程中举一反三，从理论到实践认知DNA的提取过程和操作原理。从DNA的物质组成，到DNA的复制时期，联系生物学现象。在理解DNA的理化性质的基础上，利用其理化性质对DNA进行分离。三、材料器具材料：新鲜菠菜4kg。试剂：氯化钠1000g、SDS500g、无水乙醇4000ml、二苯胺200ml。器材：200ml烧杯60个、试管100支、研钵30个、玻璃棒30个、

5、纱布2包、不锈钢药勺30个、滤纸5包。仪器：天平2台、水浴锅2个、漏斗30个。DNA是大分子高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘度。DNA对紫外线有吸收作用，当核酸变性时，吸光值升高；当变性核酸可复性时，吸光值又会恢复到原来水平。温度、有机溶剂、酸碱度、尿素、酰胺等试剂都可以引起DNA分子变性，即使得DNA双键间的氢键断裂，双螺旋结构解开。四、实验理论基础1、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响；大多数蛋白质不能忍受60－80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性；洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但

6、对DNA没有影响。四、实验理论基础2、DNA的溶解度DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反。四、实验理论基础3、DNA在酒精溶液中的溶解性DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。1、实验材料的选取凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，更具有操作性，根据实验目的选取适当的材料和方法。鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培

7、养的大肠杆菌。五、实验操作原理2、细胞破碎动物细胞：没有细胞壁破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。原理：蒸馏水对于细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。植物细胞：需要先用一定的洗涤剂和氯化钠溶解细胞膜，洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放，氯化钠有利于DNA的溶解。研磨：使DNA充分释放，洗涤剂等更容易充分接触细胞膜。用液氮研磨可有效的防止DNA降解。五、实验操作原理2、细胞破碎DNA

8、降解的原因：温度：高温,