DNA的粗提取与鉴定实验

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1、“DNA的粗提取与鉴定实验”分类比较湖北省恩施清江外国语学校彭邦风一、不同试剂用途及原理比较试剂浓度用途原理（“△”为实验的主要原理）NaCl溶液2mol/L溶解DNADNA在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变，溶解度在2mol/L吋最大、0.14mol/L时最小△0.14mol/L析出DNA0.015mol/L鉴定时的溶媒该浓度下也能溶解DNA酒精95%（体积分数）除杂以提纯DNADNA不溶于酒粘:，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液△二苯胺鉴定剂DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色△柠檬酸钠0.lg/mL抗凝剂除去血液中的钙离子，防止血液凝固二、方法步骤比较项目方法步骤添加

2、物质及冃的操作要求及冃的取用与要求冃的要求冃的制备鸡血细胞液（教师准备）取0.lg/mL的柠檬酸钠lOOmL于500mL烧杯中，加鸡血180mL抗凝缓慢搅拌混匀血液与柠檬酸钠，防血凝离心或置于冰箱使血细胞与血浆分离1・提取鸡血细胞的细胞核物质20mL蒸馆水促进血细胞吸水破裂，释放核物质搅拌：单向、快速、5min加速血细胞破裂过滤：1-2层纱布滤取含DNA的滤液2.溶解细胞核内的DNA2mol/L的NaCl溶液40mL溶解DNA搅拌：单向、缓慢、lmin促进DNA溶解3.析出含DNA的黏稠物加蒸镭水至黏稠物不增加为止降低NaCl溶液浓度，析出DNA搅拌：单向、轻轻混匀溶液，促进析出完整DN

3、A分子4.滤取含DNA的黏稠物3层〜4层纱布过滤获取含DNA的黏稠物5.将DNA的黏稠物再溶解2mo1/L的NaCl溶液20mL再溶解DNA单向搅拌使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中6.过滤含冇DNA的氯化钠溶液3层〜4层纱布过滤滤取含DNA的滤液7.提取含杂质鮫少的DNA加入冷却的、体积分数为95%的酒精50mL让部分杂质溶于酒精，析出含杂质较少的DNA搅拌：单向促进杂质溶解、DNA析岀川玻璃棒卷起丝状物，用滤纸吸水获得DNA（白色乳状丝状物）8.DNA的鉴定向2支20mL试管各加0.015mol/L的NaCl溶液一支对照，一支溶解DNA（作溶媒）搅拌促进DNA溶解各加4mL二苯胺试剂作为

4、DNA鉴定剂沸水浴5min,冷却观察颜色DNA所在试管溶液变蓝色三、DNA的粗提取和鉴定实验中应注意的问题1.盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。因为鸡血细胞破碎后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附，细胞内DNA的含量比较少，如果被玻璃窖吸附却祁分，提取的DNA就会更少。因此，实验过程屮最好使用赠料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中DNA的损失。2.获取较纯净的DNA的关键步骤。⑴充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞的细胞核中。将鸡血细胞液与蒸憎水混合后，必须用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使鸡血细胞加速破裂，并释放出DNA。⑵沉淀DNA时必须川冷酒精。实验前必须准备好大量的体枳分数

5、为95%的酒精，并在冰箱中至少存放24h。⑶正确搅拌含有悬浮物的溶液。实验步骤3、5、7都需要用玻璃棒搅拌。在进行步骤3、5时，玻璃棒不耍直接接触烧杯底部，而且搅拌耍轻缓，以便获得较完整的DNA分了。进行步骤7时，要将玻璃棒插入烧杯屮溶液的屮间，用手缓慢转动5niin〜lOmin。3.木实验屮鉴定DNA的方法为二苯胺法。如果在没有二苯胺的情况下也可以用以下几种方法。⑴配制染色剂。用蒸镭水配制0.05%的溟化乙锭（EB）溶液。⑵将玻璃棒上缠绕的口色絮状物抹于蜡纸上，再滴1滴EB溶液染色。⑶将蜡纸放在紫外灯（260nm）下照射（暗室中），可见橙红色的荧光（DNA的紫外吸收高峰在260nm处）

6、。4.典例解析1.下列关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验原理中，说法错误的是A.DNA在氯化钠溶液屮的溶解度随溶液浓度的变化而改变B.利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNAC.DNA是人分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂A.DNA溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应解析：该实验依据的原理是A、B、D,DNA不溶于酒精（属有机溶剂），C说法错误。答案：C1.下列关于实验操作的说法中，有误的是（）A.该实验中有两次加入蒸係水，均是为了析岀DNAB.该实验学生操作中多次用到搅拌，除最后一步未强调方向外，其余均要求单向搅拌C.该实验中有3次过滤，过滤

7、时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关D.实验三次加入NaCl溶液，无论浓度是2mol/L,还是0.015mol/L,均是为了溶解DNA解析：对照比较表可知，除A说法冇误外，其余各项均正确。两次加蒸锚水，第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质（DNA）,第二次是为了降低NaCl溶液的浓度从而析出DNAo答案：A2.填写木实验操作过程中所用试剂。⑴提取鸡血细胞中核物质：；⑵溶解核内DNA：；⑶析出溶液中的DNA：;⑷DNA粘稠物的再溶解