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1、【实验】DNA的粗提取与鉴定一、实验原理1.DNA在NaCl溶液中的溶解度随NaCl浓度的不同而不同。当NaCl的浓度为0.14mol/LIbf,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可使溶解在MaCl溶液中的DM析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但是细胞屮的其他许多物质溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取含杂质较少的DNAo3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色；DNA还冇遇甲基绿溶液被染成蓝绿色的特性。上述两种方法均可用于鉴定DM的存在。二、材料用具鸡血细胞液；铁架台，铁环，银子，三脚架，酒桔灯，石棉网，载玻片
2、，玻璃棒，滤纸，滴管，量筒（lOOmL,1个）.烧杯（lOOmL,1个，50mL>500mL各2个），试管（20mL,2个），漏斗，试管夹,纱布;体积分数为95%的酒精溶液（实验前置于冰箱内24h）,熬他水，质最浓度为0.lg/mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的氯化钠溶液，二苯胺试剂三.方法步骤步骤制备鸡血细胞液提取细胞核物质溶解DXA析出DNA并滤取操作方法•100mL鸡血100ml0.1g/mL柠檬酸钠上清液鸡血细胞液鸡血细胞液过滤含DNA的黏稠物原理収0.lg/mL的柠
3、檬酸钠溶液lOOmL,与新鲜的鸡血混介并搅拌，然片渺置一天或离心机离心约2〜3min,除去上清液取20mL蒸锚水与约5〜10mL的鸡血细胞液混合并充分搅拌，然后用单层纱布过滤，収滤液于烧杯屮取2mol/L的NaCl溶液40mL与上述滤液混介后，用玻璃棒沿一个方向搅拌lmin防止血液凝固，使血细胞与血浆分离使细胞过度吸水而破裂DNA在高浓度氯化钠溶液中溶解度最人沿烧杯内壁慢慢加入蒸懈水DNA的并轻轻搅拌，至溶解度白色丝状粘稠随氯化物不再增加时钠溶液停止加水，然后浓度的用多层纱布过降低而滤，取纱布上的降低粘稠物DNA的
4、再溶解川锻子夹取纱布上的粘稠物放入20mL浓度为2mol/L氯化钠溶液屮，搅拌至完全溶解，然后用两层纱布过滤，取其滤液放入小烧杯屮在度钠中度A浓化液解大DN高氯溶溶故提取较纯净的DNA取95%的、冷却的酒精50niL与滤液混合搅拌,待出现丝状物时用玻璃棒将其卷起DNA彳、溶于酒粘，出现沉淀DNA的鉴定5uL0・0l5mol/L应化饷涪懣提取物缶匚苯胺取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为0.015mol/L的NaCl溶液5mL,将丝状物溶解。然后放入其中一支试管中，川玻璃棒搅样，使丝状物溶解。然后，向两支试管中
5、各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置丁•沸水中加热5min,等试管冷却后，观察并IL比较两支试管中溶液颜色的变化。遇胺水会蓝A苯沸}成臥二{浴染色卩q、常见问题分析1.从鸡血细胞核屮提収的物质是DNA吗？在鸡血细胞中加入蒸懈水，并且搅拌，利用渗透作用原理使鸡血细胞破裂，搅拌进-•步促进了鸡血细胞的破裂,丁•是释放出其中的DNA,当然也有少量的RNA,还的蛋口质。因此，释放出的物质是DNA、RNA和蛋口质的混合物，不仅仅只有DNAo2.怎样提高血细胞因低渗而破裂的效率？血细胞的细胞膜对低渗溶液冇一定的抵抗能
6、力，这称为渗透脆性。一般而言，血细胞与蒸饰水相混合而使血细胞处于极度的低渗环境之中，细胞因大量失水而致最终破裂并释放出胞内物（包括细胞核）。为促进细胞在低渗条件下破裂，可以辅以快速而有力的搅拌，使Z受机械震荡而更易破裂。3.怎样才能把血细胞释放的DNA滤入收集的滤液屮？这一步较难处理，在过滤过程中常常发生因粘稠的果豚样物质堵塞过滤纱布的网眼而使后续的过滤难以完成，很多DNA没能滤入滤液中，这是造成失败的主要原因Z-o解决的方法冇：过滤时待过滤溶液倒入漏斗的速度应缓慢，以免沉积于溶液屮层的胶状物-讣就把纱布堵住，使过
7、滤不能完成；一旦出现人量胶状物使过滤不能进行卜•去，切忌用力挤压而使胶状物也滤入滤液Z中，可以把胶状物重新用适量的2molNaCl溶液进行搅拌，使其屮的DNA得到溶解，然后再进行过滤。4.实验中看到的丝状物的粗细是不是DNA分子的直径呢？不是。因为DNA分子直径只有2nm。丝状物是多个DNA分了聚在一起形成的。5.盛放鸡血细胞液的容器,最好是槊料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附，山于细胞内DNA的含量本來就比较少「再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用蜩料
8、的烧杯和试管，这样可以减少提取过程中DNA的损失。同理，玻璃棒有吸附DM的作丿IJ,可通过缓缓旋转玻璃棒的方法卷起浓缩后的DNA丝状物。6•利用DNA在浓度较低的氯化钠溶液屮溶解度小的原理，向含有DNA的浓度较高的氯化钠溶液屮加入大量（300mL）蒸饰水，稀程氯化钠溶液，使DNA的溶解度下降，而蛋白质的溶解度增窩（这就是蛋白质的盐溶现象），从而使二者分离。7
