实验十DNA的粗提取与鉴定

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1、实验十一DNA的粗提取与鉴定教学目的1.初步掌握DNA粗提取和鉴定的方法。2.观察提取出来的DNA物质。实验原理1.DNA在NaCl溶液中的溶解度是随NaCl的浓度变化而改变的。DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。2.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的DNA。3.DNA+二苯胺沸水浴>蓝色(用于DNA的鉴定)实验步骤1.材料制备0.lG/ml柠檬酸钠lOOmh卜500ml烧杯-*玻璃棒搅拌-*1000r/min离心2min-*

2、吸去上清液活鸡血180mlJ即得鸡血细胞液(也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血细胞自行沉淀)2.方法步骤「取血细胞液5-10ml+20ml蒸馅水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌(1)提取血细胞核物质^纱布过滤，滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质I原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加J速血细胞破裂(2)溶解核内DNA:滤液+2mol/LNaCl溶液40ml,玻璃棒沿一个方向搅拌I(3)析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馅水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出I现丝状物，当丝状物不再增加时，停止加水(此时Na

3、Cl溶▼液相当于稀释到0.14mol/L)(4)滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上(5)DNA粘稠物再溶解：f20ml2mol/LNaCl溶50ml烧杯，JI上述粘稠物J缓慢搅拌3min(6)过滤含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2层纱布过滤，滤液中含DNAI(7)提取含杂质较少的DNA：上述溶液+95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃；棒将丝装物卷起。—0.OOlSmol/LNaCl濬液5ml—钿I二茉胺沸水浴北沖(不出现浅蓝色)I管2管(8)DNA鉴定：——0.00l5mol/LN3

4、Cl濬液5ml——伽

5、二茉胺——銘状物(DNA)沸水浴(溶液逐渐出现浅蓝色)实验关键：本实验成功的关键是获取较纯净的DNA,因此应注意：1.充分搅拌鸡血细胞液。DNA存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馅水混合以后，应用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出DNA2.沉淀DNA必须用冷酒精。实验前必须准备好大量95%的酒精，并在冰箱中(5°C以下)至少存放24小时。3.正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第(3)、(5)步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌要轻缓，以便获得较完整的DNA分子。在步骤(7),要将玻璃棒插入烧杯溶

6、液中间，用手缓慢转动5-lOmin。【同类题库】・在“DNA的粗提取与鉴定”的实验中分别使用2mol/L、0.Mmol/L、2mol/L、0015mol/L的氯化钠溶液，其作用分别是(A)A.溶解、析出、溶解、溶解C.溶解、溶解、析出、溶解B.析出、溶解、析出、溶解D.溶解、析出、溶解、析出.下列图示屮能反映DNA溶解度与NaCT溶液浓度之间关系的是(C)0.14NaCl浓度（jwI/L）A0.14NaCl浓度（jwI/L）B§?一簷解度ST-擢解度0.14NaCl浓度（mol/L）C0.14NaCl浓度（mol/L）D.DNA

7、在下列哪种浓度的NaCl溶液中溶解度最低（B）A.2.00mol/LB.0.14mol/LC.0.015mol/LD.0.10mol/L.在DNA的粗提取过程中，初步析出DNA和提取较纯净的DNA所用的药品的浓度和名称分别是(B)①0.1g/ml的柠檬酸钠溶液②2.OOmol儿的NaCl溶液③0.14mol/L的NaCl溶液④体积分数为95%的酒精溶液⑤0.015mol/L的NaCl溶液⑥0.04mol/L的NaCl溶液A.①③⑤B.③④C.②④D.②③④.与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是(C)A.操作时缓缓滴加蒸馅水，

8、降低DNA的溶解度B.在操作A时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整C.加蒸馆水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度，两者均可析出D.当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl的浓度约为0.14mol/L..(多选)下列有关“DNA粗提取”的操作中，正确的是(ABCD)A.在鸡血细胞液中加入蒸馅水B.在“析出DNA粘稠物”时，要缓缓加入蒸馅水，直至溶液中粘稠物不再增多C.在用酒精凝集DNA时，要使用冷酒精D.用玻璃棒搅拌时要沿一个方向.“DNA的粗提取与鉴定实验”中有三次过滤：(1)过滤用蒸馅水稀释过的鸡血细胞液。(2)过滤含粘稠物的

9、0.14mol/LNaCl・(3)过滤溶解有DNA的2mol/LNaCl.以上三次过滤分别为了获得(A)A.含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B.含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含DNA的滤液C.含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布中DNAD