实验十一 dna的粗提取与鉴定

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1、实验十一DNA的粗提取与鉴定　　第六章遗传和变异　　实验十一实验十一DNA的粗提取与鉴定　　第六章遗传和变异　　实验十一DNA的粗提取与鉴定　　教学目的　　1、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法　　2、观察提取出来的DNA物质　　实验原理　　1、DNA在NaCl溶液中的溶解度，是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14mOl／L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。　　2、DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。　　3、DNA遇二苯

2、胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。　　注意事项　　1、步骤3析出含DNA的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。　　2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。　　实验用具　　鸡血细胞液（5～10mL）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g／mL的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol／L和0.015mol／L的NaCl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100mL，1个，50mL，500mL，各2个），漏斗，试管（20mL，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100mL，1个），纱布，镊子，

3、滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。　　课时安排　　　一课时　　课前准备　　制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g／mL的柠檬酸钠溶液100mL，置于500mL烧怀中，注入新鲜的鸡血（约180mL），用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。也可以用离心机离心2min（转速1000转/分）。用吸管吸去上清液。　　板书　　实验十一DNA的粗提取与鉴定　　实验原理　　1、析出溶解在NaC1溶液中的DNA。　　2、用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。　　3、DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。　　方法步骤：　　1、提取

4、鸡血细胞的细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。5min　　2、溶解细胞核内的DNA　　3、析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢　　4、过滤：取黏稠物　　5、再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3min　　6、过滤：取滤液。　　7、提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5min　　8、DNA的鉴定：沸水浴5min（（１）无变化（２）蓝色）　　上节课我们通过几个验证性实验，证明了DNA是主要的遗传物质。那么DNA是什么样的物质呢？今天我们就通过实验将它提取出来，进行观察和鉴定。　　　通过预习，我们知道选用鸡血细胞液作为实验材料。在制备鸡血细胞

5、液时，所用的柠檬酸钠有防止血液凝固的作用。　　　　制备过程中，一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。我们采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。　　大家在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题。　　1、要严格按照实验指导的方法步骤去操作。　　2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作。　　3、在DNA的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。　　下面在实验进行过程中，要思考每一操作步骤

6、要达到什么目的。　　在进行步骤1时，利用搅拌的5分钟，做如下提问：　　为什么要加蒸馏水？加入蒸馏水后细胞将会怎样？　　（让细胞内溶液的浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破）　　为什么要用力搅拌？　　（可以加速血细胞和细胞核的破裂）　　所以下一步骤过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质。　　在进行步骤3时，要向全班明确：这一步骤是这个实验成败的关键，注意加蒸馏水的方法和使用玻璃棒的方法，千万不能太快太猛，防止打碎DNA。　　观察滤取出来的黏稠物的颜色。　　有的同学提取的黏稠物较少，原因可能是在溶解DNA时不充分，也可能是析出黏稠物时搅拌的快了。　　将黏稠物再溶解时一定要充

7、分，多搅拌。以免有DNA损失。　　加入冷酒精时动作要慢。　　当玻璃棒上出现丝状物缠绕时，继续慢慢搅拌。至不再增加时，取出吸干上面的水分。仔细观察丝状物呈什么颜色？（黄色）　　这些丝状物要用二苯胺鉴定。使用二苯胺时要注意不要接触到药液。进行沸水浴时，在实验室较为通风的地方集体进行。　　利用沸水浴的5min。　　步骤3中加入蒸馏水的目的？与步骤1有什么区别？　　（步骤3中加蒸馏水是使NaCl溶液的浓度逐渐降至0．14mol／L，使DNA的黏稠物析出。而步骤1加蒸馏水是为了让细胞吸水胀破）　　步骤7为什么要加50mL的冷酒精？　　（因为DNA不