HPLC法检测设备表面枸橼酸托法替布含量.doc

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1、HPLC法检测设备表面枸橼酸托法替布含量　　【摘要】本文建立用高效液相法（HPLC）对设备表面的枸橼酸托法替布残留的检测方法。方法：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1%醋酸铵溶液-乙腈75∶25为流动相；检测波长为286nm。结果：该方法线性范围为7μg/ml到43μg/ml，R2=0.9997；回收率为99.5%，取样回收率为91.0%；且该方法专属性强、灵敏度高、在24小时内溶液稳定性良好，够准确的检测出设备表面残留的枸橼酸托法替布含量。　　【关键词】高效液相法HPLC；枸橼酸托法替布；设备表面残留　　【中图分类号】R971【文献标识码】A【

2、文章编号】2095-6851（2017）07--02　　1.前言　　类风湿关节炎目前大多被认为是人体自身免疫性疾病，亦是一种慢性的综合征，表现为外周关节的非特异性炎症。此时患病关节及其周围组织呈现进行性破坏，并致使受损关节发生功能障碍，影响全球0.8%的成人人口[1，2]。人们正越来越致力于类风湿性关节炎药物的开发。　　枸橼酸托法替布片是由美国辉瑞制药公司开发的一种新型的治疗类风湿性关节炎（RA）的药物，用于对氨甲喋呤治疗应答不充分或不耐受的中至重度活动性类风湿性关节炎成人患者。[3]作为Janus激酶（JAK）抑制剂，托法替布通过作用于JAKs来预防

3、STATs磷酸化和激活。2012年美国食品药品监督管理局批准该药品上市。本文对设备表面的枸橼酸托法替布残留的检测方法进行了考察研究。　　2.方法　　2.1仪器与试剂　　仪器：Agilent1260液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；BT125D分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；KQ500E超声清洗器（中国昆山市超声仪器有限公司）。试剂：枸橼酸托法替布对照品（自标，批号LFQ170315，含量100%，水分0.13%）；醋酸铵（温州市化学用料厂）；醋酸（上海凌峰化学试剂有限公司）；乙腈（J.TBaker）。　　2.2色谱条件　　以十八烷基硅烷键合硅胶为

4、填充剂（Shim-packVP-ODS4.6×150mm5μm）；以0.1%醋酸铵溶液（用醋酸调节pH值至5.0）-乙腈75∶25为流动相；检测波长为286nm；进样量为20μl；理论板数按托法替布峰计算应不低于2000。　　2.3溶液制备　　对照溶液的制备：取枸橼酸托法替布对照品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含枸橼酸托法替布28.68?g的溶液，摇匀，作为对照品溶液。　　供试品溶液的制备（模拟生产设备进行取样）：取合适浓度的对照品溶液适量均匀滴加涂布在面积约为25cm2的不锈钢板上，待溶液干后，用干净的棉球（纯化水浸润）上下左右方向各擦拭

5、至少3次，然后将棉签浸在10ml纯化水中超声10min后，取浸出液过滤，取续滤液即得。　　枸橼酸托法替布片溶液的制备：取枸橼酸托法替布片适量，磨成细粉，精密称定置量瓶中，加纯化水适量，超声10min，使枸橼酸托法替布溶解，用纯化水稀释制成每1ml中含枸橼酸托法替布约28.68μg的溶液。　　3.结果　　3.1系统适用性。精密取对照品溶液（浓度约为28.68μg/ml）20μl注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图。6次对照品峰面积RSD为0.1%，该系统具有良好适用性。　　3.2专属性。取空白溶剂、空白辅料溶液、对照品溶液和枸橼酸托法替布片溶液进行测

6、定。空白溶剂和空白辅料溶液在托法替布峰位置均无出峰，对照品溶液和枸橼酸托法替布片溶液主峰的保留时间一致。结果表明，空白溶剂和辅料空白对枸橼酸托法替布主峰没有干扰，该方法专属性强。　　3.3准确度。取处方量的空白辅料和对照品分别制成含枸橼酸托法替布14.34μg/ml、28.68μg/ml和43.02μg/ml的溶液各3份，进行测定。其中50%的回收率为98.4%，100%的回收率为98.6%，150%的回收率为99.5%，9份样品RSD为0.65%。各浓度的回收率均大于98%，该方法回收率良好。　　3.4取样回收率。吸取对照品储备液（286.8μg/m

7、l）0.5ml滴加涂布在面积约为25cm2的不锈钢板上，待溶液干后，用干净的棉球（纯化水溶液浸润，挤去多余水分）按要求的方法进行擦拭，然后将棉签浸在5ml纯化水中超声10min后，取浸出液进行测定。其取样回收率为91.0%，由此表明该方法能将设备表面的大部分残留擦拭下来。　　3.5线性。取对照品适量，用纯化水配制成浓度分别为7.17μg/ml、14.34μg/ml、21.51μg/ml、28.68μg/ml、35.85μg/ml和43.02μg/ml的溶液，精密吸取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得回归方程为y=

8、43288x+2.9833，R=0.9997。在7μg/ml到43μg/ml的?舛确段В?方法