HPLC法同时测定尿液中草酸和枸橼酸含量的方法学评价及临床应用

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1、万方数据第19卷第1期2010年1月v01．19No．1Jan．2010武警医学院学报ActaAcademiaeMedicinaeCPAF47HPLC法同时测定尿液中草酸和枸橼酸含量的方法学评价及临床应用廖贤平，宋光庆(武警广东总队医院泌尿外科，广东广州。510507)摘要：【目的】建立高效液相色谱法同时测定尿液中草酸和枸橼酸含量，并应用于临床。【方法】采用LC—C18(250nun×4．6into，5斗m)色谱柱；LC—c18M．6113．111X12．5mm，5pm)为预柱；流动相为0．25％磷酸二氢钾(含2．5mm01]L四丁基硫酸氢铵和2．65x10-5mol／L一

2、--乙胺四乙酸二钠，pH2．0)；检测波长210nm，流速1．0ml／min；柱温25。C；进样量20斗l。72例草酸钙结石患者及40例健康志愿者，分为一水草酸钙组(40例)、二水草酸钙组(32例)和对照组(40例)，收集上述112例24h尿液处理后取上清液进行HPLC分析，测得尿中草酸和枸橼酸含量后进行统计学分析。【结果】草酸与枸橼酸的标准曲线分别为：Aoxa=12528．4Coxa--641．9(f卸．9990，J1=5)和Acit=1607．5Ccit一13．8(r=o．9990，n=5)；最低检测限分别为0．4IX#ml和O．8“#mh线性范围分别为1．563。10

3、0斗s／m1和3．125—200“g／ml；平均回收率分别为96．6％和95．7％；日内及日间精密度RSD分别小于13．5％和8．3％。二水草酸钙组结石患者的尿草酸高于一水草酸钙组和对照组(P<0．05)，一水草酸钙组患者的尿枸橼酸低于二水草酸钙组和对照组(P<0．05o【结论】高效液相色谱法用于检测人24h尿液中的草酸和枸橼酸，方法简单，灵敏。对临床草酸钙结石患者尿液中草酸和枸橼酸测定结果统计发现一水草酸钙结石的形成与结石抑制物枸橼酸的缺乏有关，二水草酸钙结石的形成与高尿草酸有关。关键词：高效液相色谱法；尿液；草酸；枸橼酸【文章编号】1008—5041(2010)01—0

4、047-04【中图分类号】R446．12【文献标识码】AEvaluationandclinicalapplicationonsimultaneousdeterminationofthecontentsofoxalateandcitrateinhumanurinebyHPLCLIAOXian-ping。SONGGuang-qing(DepartmentofUrology，GuangdongProvincialCorpsHospital，ChinesePeople。sArmedPoliceForce，Guangzhou510507，China)Abstract：【Objectv

5、e】ToestablishamethodofsimultaneousdeterminingthecontentsofoxalateandcitrateinurinebyHPLC，andevaluateitsclinicalapplication．【Methods】LC—C18(250mmX4．6ram,5“m)columnandLC-C18(4．6nunX12．5miTt，5斗m)guardcolumnwereused．Aqueoussolutioncontaining0．25％potassiumdihydrogenphosphate，2．5mmol／Ltetrabutyl

6、ammoniumhydrogensulphateand2．65×10-5mol／LEDTAatpH2．0wereused髂mobilephase．FlowrateWasat1．0ml／min．columntemperatureWasat25％andinjectionvolumewag20弘1．72patientswithcalciumoxalate叫岫stoneand40healthyvolunteerswereselectedanddividedintothreegroups：calciumoxalatemonohydrate(CO啪group，calciumoxalat

7、edihydrate(COD)groupandnormalcontr01．24hurinewascollectedanddetectedbyHPLC．111edatawereanalyzedbystatisticalmethod．【Results】ThestandardCtllll，eofoxalicandcitricacidrespectively：Aoxa=12528．4Coxa一641．9(r=0．9990，n=5)andAcit=1607．5Ccit一13．8(r=0．9990，11=5)nedetecti