hplc法测定四君颗粒中的甘草酸含量

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1、HPLC法测定四君颗粒中的甘草酸含量【摘要】［目的］用HPLC法测定四君粒颗中甘草酸的含量。［方法］HPLC用外标一点法，KromasilODS1C18柱，甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）为流动相，流速为1.0ml/min，λ=250nm；［结果］甘草酸在0.1～1?g范围内呈良好线性，回归方程为Y=444185X-9336.9r=0.9992，平均加样回收率99.7%、RSD%为1.0%（n=6）；［结论］方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为四君子粒颗中甘草的定量分析提供了科学

2、有效的方法。【关键词】四君子粒颗；甘草酸；HPLC　　Abstract：［Objective］ToestablishthemethodfordeteminingthecontentofGlycyrrhizinaticacidinSijunziKelibyHPLC.［Methods］UsingKromasilODS1C18Column，methyol-0.2mol/Lammoniumacetate-aceticacidglacial（67∶33∶1）asthemobilephase，detectionandflol/

3、min.［Results］TheCalibrationCurveethodpleandaccurateandproper，ethodofRadixetRhizomaglycyrrhizaeinSijunziKeliandthereduplicationoftheresultm，5μm)。（2）流动相：甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）。（3）检测波长：测定甘草酸的紫外吸收波长，证明他们在250nm有较大吸收，确定为250nm为检测波长，阴性对照无吸收峰。（4）流速：1.0ml/min；进样量

4、：10μl。在此色谱条件下，对照品（图谱1）及经前处理后的供试品的甘草酸与其它组分基本达到分离（图谱3）。　　2.2对照品的制备　　精密称取真空干燥（五氧化二磷）24h的甘草酸单铵盐对照品适量，精密称定，用流动相溶解并制成每1ml含50μg（己折合为甘草酸）的溶液，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg折合甘草酸为0.1959mg)。　　2.3供试品溶液的制备　　取本品粉末约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相约45ml，超声处理（功率250in，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，

5、即得。　　2.4标准曲线　　取“对照品的制备”项下的对照品溶液，分别进样2、5、10、15和20μl，按选定的色谱条件测定峰面积，以进样量（μl）为横坐标，峰面积为纵坐标，作图并进行线性回归，计算回归方程为Y=444185X-9336.9r=0.9992结果表明甘草酸在0.1～1.0μg范围内的良好线性，见表1。表1标准曲线（略）　　2.5检测限　　精密称取甘草酸单铵盐适量，用流动相多级稀释后进样，结果在信噪比（S/N）为3时，本法的最低检测限为0.01ng/ml。结果见图1。　　2.6阴性样品的测试　　做缺甘草的

6、样品；按供试品制备法制备供试品后测定，分别测定在甘草酸相应位置无明显峰出现(图2)。　　2.7精密度试验　　（1）日内精密度试验：取甘草酸铵对照品溶液，同一天不同时间进样6次，每次10μl，记录峰面积，结果RSD为0.1%，见表2。（2）日间进样精密度：取甘草酸铵对照品溶液，连续6天，每天进样1次，每次10μl，记录峰面积结果RSD为0.1%，见表2、3。表2日内精密度试验结果（略）以上结果表明，系统精密度良好。　　2.8样品测量的重现性试验　　取批号为050104的四君子颗粒样品粉末6份，每份约5g，精密称定，置

7、50ml量瓶中，加流动相约45ml，超声处理（功率250in，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液各10μl及对照品溶液10μl进样，计算样品中甘草酸含量，考查测定结果的一致性，测定结果RSD为0.1%见表4。结果表明，测定结果的重现性良好。表4样品测定重现性试验结果（略）　　2.9加样回收率试验　　取批号为050104的四君子颗粒样品粉末约2.5g，精密称定，共6份，分别置50ml量瓶中，加流动相约30ml，精密加入浓度为0.2mg/ml的甘草酸铵对照品溶液10ml，超声处理（功率250in，取出，放

8、冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液各10μl及对照品溶液10μl进样，计算样品中甘草酸含量，测定结果的一致性，测定结果见表5。结果表明，本测定方法的回收率良好。表5加样回收试验结果（略）　　2.10样品测定结果见表6。表6样品甘草酸含量（略）从对三批四君子颗粒中试样品的测定结果可以看出，样品中甘草酸铵的平均含量为11.8mg/袋，结合药材（炮制品）含量