hplc法测定不同产地甘草中甘草酸的含量论文

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1、HPLC法测定不同产地甘草中甘草酸的含量论文【摘要】目的用HPLC法测定甘草中甘草酸的含量。方法以C18柱（4.6mm×15cm，5μm）为分析柱，乙腈2％醋酸溶液（36∶64）为流动相；流速为0.6ml/min,柱温25℃，紫外检测波长为250nm，采用外表法定量测定。结果表明甘草酸在0.1630～0.8149μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)。其平均加样回收率为99.76%，RSD为0.96%(n=5)。结论本方法简便可靠，重现性好，可作为甘草酸的质量控制方法。【关键词】甘草甘草酸高效液相色谱法含量测定【Abstract】Obj

2、ectiveTosetupaHPLCmethodforthedeterminationoftheglycyrrhizicacidinlicoricefromdifferentregions.MethodsAC18column（4.6mm×15cm.freel）obilephaseconsistingofacetonitrile2%aceticacid(36∶64).Theflol/min,thetemperatureofcolumn.Todeterminatethequantitativeassayusingexternalsatadardme

3、thod.ResultsThelinearofglycyrrhizicacidethodple,convenient,andination甘草为豆科多年生草本植物，始载于《神农本草经》，素有“国老”之称，是我国一味非常重要的中药材，具补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药之功效［1，2］。甘草中含有甘草酸和甘草苷等物质，其中甘草酸是最重要的活性成分［3，4］，具有抗炎、抗溃疡、抗肝毒素以及抗癌等药理作用。目前，还发现其具有体外抗甲肝病毒、人体免疫缺陷病毒和SARs病毒的活性，临床上用于治疗慢性肝炎和艾滋病［5，6］。《中药药典》收载的品

4、种为甘草的干燥根及根茎［7］。但实际上，商品甘草的产地来源复杂，其有效成分甘草酸的含量也存在很大差异。为此，本文作者以甘草中有效成分甘草酸为检测指标，采用HPLC法，对甘肃和山东4个产地的甘草进行了初步的分析研究。1材料与方法1.1仪器HP1100高效液相色谱仪，YCQ300超声波清洗器（上海凯波超声设备有限公司），ADER182A型电子天平。1.2试药与方法甘草酸单铵盐（由中国药品生物制品检定所提供，批号07049912）；甘草样品经本实验室鉴定为豆科植物的干燥根及根茎；甲醇、乙腈为色谱纯；95%乙醇、无水乙醇均为分析纯；冰醋酸为优级纯；

5、水为双蒸水。1.2.1色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（C18柱，4.6mm×15cm，5μm）；乙腈2％醋酸溶液（36∶64）为流动相；流速为0.6ml/min；柱温25℃；紫外检测波长为250nm。1.2.2对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密吸取2ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。每1ml甘草酸单铵盐对照品0.0416mg，折合甘草酸为0.0407mg。1.2.3供试品溶液的制备：取本品内容物0.5g，精密称定，加50ml甲醇，超声处理4

6、5min，放冷，滤过，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得。1.2.4标准曲线及线形范围：分别精密吸取对照品溶液4.0、8.0、12.0、15.0、20.0μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定。以对照品进样量（μg）为横坐标，5次测得的峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，见表1。得回归方程为Y=1062108X＋30988(r=0.9999)。结果表明甘草进样量在0.1630～0.8149μg范围内线性关系良好。表1甘草酸标准曲线数据进样量1.2.5精密度实验：精密吸取同一对照品溶液10μl，重复进样5次，记录色谱图，以峰面积计算其R

7、SD为0.72%，说明仪器操作过程中精密度良好。1.2.6稳定性：取甘草药材按供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12h进样，每次进样10μl，测定甘草酸峰面积计算含量，得甘草酸的RSD为0.95%。1.2.7重现性：取甘草药材按供试品溶液制备项下的方法制备5份供试品液，分别进样，每次进样10μl，测定甘草酸峰面积，计算含量，得甘草酸的RSD为1.04%。1.2.8加样回收率：精密称取已知含量的甘草药材适量，分别精密加入一定量的甘草酸对照品，结果甘草酸的平均加样回收率为99.76%,.freelin）对提取的影

8、响，结果显示超声处理45min，获得的色谱图出峰多，且分离度、分辨率都较为理想［8］。3.2检测波长本实验采用250nm作为检测波长，也