HPLC法测定四君颗粒中的甘草酸含量.doc

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1、HPLC法测定四君颗粒中的甘草酸含量【摘要】［目的］用HPLC法测定四君粒颗中甘草酸的含量。［方法］HPLC用外标一点法，KromasilODS1C18柱，甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）为流动相，流速为1.0ml/min，λ=250nm；［结果］甘草酸在0.1～1?g范围内呈良好线性，回归方程为Y=444185X-9336.9r=0.9992，平均加样回收率99.7%、RSD%为1.0%（n=6）；［结论］方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为四君子粒颗中甘草的定量分析提供了

2、科学有效的方法。【关键词】四君子粒颗；甘草酸；HPLC　　Abstract：［Objective］ToestablishthemethodfordeteminingthecontentofGlycyrrhizinaticacidinSijunziKelibyHPLC.［Methods］UsingKromasilODS1C18Column，methyol-0.2mol/Lammoniumacetate-aceticacidglacial（67∶33∶1）asthemobilephase，detectionwave

3、lengthas250nmandflowratewas1.0ml/min.［Results］TheCalibrationCurvewaslinearatarange0.1～1?gfortheGlycyrrhizinaticacidandlinearequationwasY=444185X-9336.9r=0.9992.Theaveragerecoverywas99.7%andtherelatedstandarddeviation(RSD)was1.0%（n=6）.［Conclusion］Thismethodwa

4、ssimpleandaccurateandproper，whichcouldbeprovidedforscientificquantitativeanalysismethodofRadixetRhizomaglycyrrhizaeinSijunziKeliandthereduplicationoftheresultwasgood.　　Keywords：SijunziKeli；Glycyrrhizinaticacid；HPLC四君颗粒由党参、白术、茯苓和甘草四味中药组成，具有益气健脾的功能，是一古有成方，是组成各

5、种处方的基础，没有含量测定，考虑到对照品来源的困难，甘草虽然不是君药，但在处方中起着极为重要的左使作用，加之对照品来源可靠易得，为此选择测定处方中甘草所含甘草酸的含量。　　1仪器与试药日本岛津LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器；浙大N2010数据工作站。甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他有关试剂均为分析纯。对照品：甘草酸铵对照品（批号为110731-200407）购自中国药品生物制品检定所，作含量测定用。四君子颗粒浙江得恩德制药有限司（批号为050104、050105、050106）。市售药品：天津百慕药

6、业有限公司，批号：0410003。　　2分析方法　　2.1色谱条件　　（1）色谱柱：ODSC18柱(4.6×150mm，5μ3m)。（2）流动相：甲醇-0.2mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）。（3）检测波长：测定甘草酸的紫外吸收波长，证明他们在250nm有较大吸收，确定为250nm为检测波长，阴性对照无吸收峰。（4）流速：1.0ml/min；进样量：10μl。在此色谱条件下，对照品（图谱1）及经前处理后的供试品的甘草酸与其它组分基本达到分离（图谱3）。　　2.2对照品的制备　　精密称取真空干燥（五

7、氧化二磷）24h的甘草酸单铵盐对照品适量，精密称定，用流动相溶解并制成每1ml含50μg（己折合为甘草酸）的溶液，摇匀，即得(每1ml含甘草酸单铵盐对照品0.2mg折合甘草酸为0.1959mg)。　　2.3供试品溶液的制备　　取本品粉末约5g，精密称定，置50ml量瓶中，加流动相约45ml，超声处理（功率250W，频率20kHz）30min，取出，放冷，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　2.4标准曲线　　取“对照品的制备”项下的对照品溶液，分别进样2、5、10、15和20μl，按选定的色谱条件测定

8、峰面积，以进样量（μl）为横坐标，峰面积为纵坐标，作图并进行线性回归，计算回归方程为Y=444185X-9336.9r=0.9992结果表明甘草酸在0.1～1.0μg范围内的良好线性，见表1。表1标准曲线（略）　　2.5检测限　　精密称取甘草酸单铵盐适量，用流动相多级稀释后进样，结果在信噪比（S/N）为3时，本法的最低检测限为0.01ng/ml。结果见图1。　　2.6阴性样品的测试