hplc法测定不同产地甘草中甘草酸的含量

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1、HPLC法测定不同产地甘草中甘草酸的含量【关键词】甘草甘草酸高效液相色谱法含量测定【Abstract】ObjectiveTosetupaHPLCmethodforthedeterminationoftheglycyrrhizicacidinlicoricefromdifferentregions.MethodsAC18column（4.6mm×15cm，5μm）obilephaseconsistingofacetonitrile2%aceticacid(36∶64).Theflol/min,thetemperatureofcolumn.Todete

2、rminatethequantitativeassayusingexternalsatadardmethod.ResultsThelinearofglycyrrhizicacidethodple,convenient,andination甘草为豆科多年生草本植物，始载于《神农本草经》，素有“国老”之称，是我国一味非常重要的中药材，具补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药之功效［1，2］。甘草中含有甘草酸和甘草苷等物质，其中甘草酸是最重要的活性成分［3，4］，具有抗炎、抗溃疡、抗肝毒素以及抗癌等药理作用。目前，还发现其具有体外抗甲肝病毒、人体

3、免疫缺陷病毒和SARs病毒的活性，临床上用于治疗慢性肝炎和艾滋病［5，6］。《中药药典》收载的品种为甘草的干燥根及根茎［7］。但实际上，商品甘草的产地复杂，其有效成分甘草酸的含量也存在很大差异。为此，本文以甘草中有效成分甘草酸为检测指标，采用HPLC法，对甘肃和山东4个产地的甘草进行了初步的分析研究。1材料与方法1.1仪器HP1100高效液相色谱仪，YCQ300超声波清洗器（上海凯波超声设备有限公司），ADER182A型电子天平。1.2试药与方法甘草酸单铵盐（由中国药品生物制品检定所提供，批号07049912）；甘草样品经本实验室鉴定为豆科植物

4、的干燥根及根茎；甲醇、乙腈为色谱纯；95%乙醇、无水乙醇均为分析纯；冰醋酸为优级纯；水为双蒸水。1.2.1色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（C18柱，4.6mm×15cm，5μm）；乙腈2％醋酸溶液（36∶64）为流动相；流速为0.6ml/min；柱温25℃；紫外检测波长为250nm。1.2.2对照品溶液的制备：取甘草酸单铵盐对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀；再精密吸取2ml置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。每1ml甘草酸单铵盐对照品0.0416mg，折合甘草酸为0.0407mg。1.2

5、.3供试品溶液的制备：取本品内容物0.5g，精密称定，加50ml甲醇，超声处理45min，放冷，滤过，置100ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得。1.2.4标准曲线及线形范围：分别精密吸取对照品溶液4.0、8.0、12.0、15.0、20.0μl，注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定。以对照品进样量（μg）为横坐标，5次测得的峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，见表1。得回归方程为Y=1062108X＋30988(r=0.9999)。结果表明甘草进样量在0.1630～0.8149μg范围内线性关系良好。表1甘草酸标准曲线数据进样量　　1.2.5精密度

6、实验：精密吸取同一对照品溶液10μl，重复进样5次，记录色谱图，以峰面积计算其RSD为0.72%，说明仪器操作过程中精密度良好。1.2.6稳定性：取甘草药材按供试品溶液制备项下的方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12h进样，每次进样10μl，测定甘草酸峰面积计算含量，得甘草酸的RSD为0.95%。1.2.7重现性：取甘草药材按供试品溶液制备项下的方法制备5份供试品液，分别进样，每次进样10μl，测定甘草酸峰面积，计算含量，得甘草酸的RSD为1.04%。1.2.8加样回收率：精密称取已知含量的甘草药材适量，分别精密加入一定量的甘草酸对

7、照品，结果甘草酸的平均加样回收率为99.76%,RSD为0.96%(n=5)。1.2.9样品测定：按上述供试品溶液的制备方法和测定条件，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，测定4批不同产地的样品，结果见表2。表2甘草中甘草酸的含量测定结果　　3讨论3.1提取溶剂与方法本文在研究过程中，曾试验用乙醇溶解浸泡甘草药材，通过回收乙醇，残渣回流3h得到甘草酸，但此方法操作繁琐，且甘草酸成分复杂，不易过滤。后来采用超声提取处理，超声提取对于一些中药有效成分的提取是一种十分有效的方法，且操作简单、快速，而且得到的甘草酸成分纯度比较好。根据甘草中主要化学

8、成分有皂苷（如甘草酸）和黄酮（如甘草苷）等物质，考察了不同溶剂的提取，结果以甲醇超声提取最好，且样品干扰少；