hplc法测定华法林片含量

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1、HPLC法测定华法林片含量【摘要】目的建立HPLC法测华法林片的含量。方法采用DiamonsilC18(4．6mm×250mm,5μm)为分离柱；流动相：乙腈-水-冰醋酸(70∶30∶1)；流速：1ml/min；检测波长308nm，以峰面积计算。结果线性范围：0．8~5．6μg/ml，r=0．9996。平均回收率为100．64%，RSD=1．11%,n=15。结论本法简便，快捷，结果准确，重现性好，可作为华法林片质量控制的有效方法。�【关键词】Highperformanceliguidchromatography；华法林；含量测定Determinationofwarfarinintabl

2、etsbyHPLCHUANGBi-ying,YAOQiu-yan,LIMin-wei,etal.DeptofPharmacy,theFirstAffiliatedHospitalofSunYat-senUniversity,Guangdong,Guangzhou510080，China�【Abstract】ObjectiveToestablishaHPLCmethodtomeasurethecontentofwarfarintablets.MethodsADiamonsilC18column(4．6mm×250mm,5μm)wasused.Themobilephasewasamixtur

3、eof70%acetonitrile,30%waterand1%glacialaceticacid,andtheflowratewas1．0ml/min.Thedetection6wavelengthwasat308nm.ResultsThelinearcalibrationcurveswereobtainedovertherange0．8μg/mlto5．6μg/mlofwarfarin,r=0．9996．Therecoveryoftheassaywas100．64%(n=15).Thecoefficientsofvariationwas1．11%.ConclusionThemetho

4、dappearedtobesimple,convenientandprecise,andcanbeusedforcontrolofwarfarinintablets.�【Keywords】HPLC；Warfarin；Determination华法林(warfarin)为香豆素类口服抗凝药，化学结构与维生素K相似，可竞争性拮抗维生素K的作用。临床上用于防治血栓栓塞性疾病及作为心肌梗死的辅助用药[1]。本文参考文献[2]建立了HPLC法测定华法林的含量，试验结果表明，该法简便，快捷，准确，重现性好。1仪器和试药1．1仪器美国Waters公司高效液相色谱仪(515型泵，996型光电二极管阵列检

5、测器，Millennium32色谱工作站)；AG245电子天平(瑞士Mettler-Toledo公司)；SHZ-C水浴恒温振荡器；高速离心机(美国雅培公司TDx仪附件)。1．2试药华法林国产市售片(上海信宜九福药业有限公司，2．5mg/片，批号分别为A：050401，B：050301)；华法林进口片(芬兰奥立安药厂，36mg/片，C：批号为1084667)；华法林对照品(SIGMA公司，纯度98%)；所用试剂乙腈为色谱纯，其余均为分析纯，水为二次重蒸馏水。2色谱条件与系统适用性�色谱柱：DiamonsilC18(4．6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-水-冰醋酸(70∶30∶1)

6、；流速：1．0ml/min；柱温：室温；检测波长308nm；进样量20μl。在上述色谱条件下，以华法林计算，理论塔板数为4780，分离度>3，主峰保留时间为5．8min。3溶液配制3．1对照品储备液精密称取华法林对照品约250mg置于25ml容量瓶中，加0．1mol/L氢氧化钠溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，配成10mg/ml的华法林对照品储备液。3．2供试品溶液分别取样品20片，精密称定，研细，混匀。精密称取适量(约相当于华法林2．5mg)，置于50ml容量瓶中，加入0．1mol/L氢氧化钠溶液25ml，水浴(28℃)振荡30min使溶解，定容，离心(10800r/min)5min，上清

7、液用微孔滤膜滤过，精密量取续滤液1ml于25ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，配成供试品溶液。3．3阴性对照品溶液按华法林片的处方自制空白样品，精密称取适量，按“3．2”项下供试品溶液配制方法配成阴性对照品溶液。4方法和结果64．1色谱行为在上述色谱条件下，色谱图见图1。�4．2标准曲线制备精密吸取10mg/ml的华法林对照品储备溶液1ml置50ml容量瓶，加水稀释至刻度，充分摇匀，得200μg/ml的溶液，取上述溶液2ml置50