hplc法测定维生素e片含量

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1、HPLC法测定维生素E片含量作者：代晶　朱军　赵淼　杨万清【摘要】　　目的建立测定维生素E(VitE)含量的高效液相色谱法。方法采用ShimadzuC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以甲醇为流动相；检测波长为284nm，流速1.5ml·min-1。结果维生素E在0.125～5.0mg·ml-1范围内，峰面积与其浓度线性关系良好（r＝0.9999），高、中、低3种浓度的平均加样回收率为101.4％～102.7%，RSD为0.46％～0.71%，最低检测限为0.4μg·ml-1。结论本法准确、简便、快速，适用于维生素E片的含量测定。【关键词】维生素E；高效液相色谱法；含量测定Ab

2、stract：ObjectiveToestablishaRP-HPLCfordeterminationofVitaminE.MethodVitaminEinatedonHPLCinstrumentfixedaShimadzuC18column(4.6mm×250mm，5μm),andthemobilephasel·min-1.ResultsThecalibrationcurveg·ml-1forVitaminE,theaveragerecoveryrates101.4%to102.7%forthreedifferentlevelsoftheamountofVitaminE,RSD0.46％

3、to0.71%,andLODL-1.ConclusionThismethodple，quick，accurateandeffectivefordeterminationofVitaminE.ItinE.KeyinE;HPLC;determination维生素E又称生育酚，是一种脂溶性物质，在人体内主要参与生育功能、肌肉代谢等过程，具有强大的抗氧化性，是人体必须的微量元素之一。目前VitE的主要分析方法包括化学发光抑制法［1］、UV法［2］、GC法［3］、荧光法［4］和HPLC法［5］等。在这些方法中化学发光法仪器要求特殊，而荧光法、UV法、GC法易受到辅料干扰。本文采用反相HPLC法测定V

4、itE片含量，方法准确，不受其他成分干扰，取得比较满意的效果。1仪器及试剂SPD-M10A高效液相色谱仪（日本岛津）、LC-10AT紫外检测器（日本岛津）；甲醇（分析纯，山东省禹王实业总公司禹城化工厂）、无水乙醇（分析纯，沈阳正信高科技研究所试剂部）、维生素E醋酸酯对照品（日本信越制药株式会社）、维生素E片（沈阳药科大学药分教研室提供）。2色谱条件与系统适用性试验色谱柱：ShimadzuC18柱（5μm,4.6mm×250mm）日本岛津公司；流动相：甲醇；流速：1.5ml/min;进样体积：20μl；检测波长：284nm；柱温：35℃；理论塔板数按维生素E峰计算应不低于5000。3溶液的配

5、制3.1对照品溶液制备取VitE对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含VitE1.5mg的溶液，作为对照品溶液。3.2供试品溶液配制取VitE片10片，精密称定、研细。精密称取细粉适量加无水乙醇制成每1ml中含VitE1.5mg的溶液，摇匀。过滤，弃去初滤液，取续滤液作为含量测定的供试品溶液。4方法的专属性考察在上述色谱条件下,分别取对照品溶液、供试品溶液及流动相20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的主峰与对照品溶液的主峰位置相同（约15min），空白辅料在VitE峰位置处无色谱峰，VitE峰与相邻杂质峰的分离度符合要求。试验表明该方法具有良好的专属性，见图1。5方法学考

6、察5.1线性关系及检测限A.blankadfuvantsolutionB.ControlC.Sample图1维生素EHPLC色谱图Fig.1HPLCchromatogramofVitaminE取VitE对照品适量，精密称定，用无水乙醇制备成含VitE0.125、0.25、0.50、1.0、2.0、5.0mg·ml-1的溶液，分别精密吸取20(l注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积Y对维生素E浓度X进行线性回归，得回归方程为：y=3149247x+4781.6r=0.9999(n=6)。VitE浓度与色谱峰面积在0.125～5.0mg·ml-1范围内线性关系良好（r＝0.9999），检测限为

7、0.4(g·ml-1（S/N=3）。5.2精密度试验取VitE对照品适量，精密称定，用流动相制备成含VitE0.5、1.0、2.0mg·ml-1的溶液，分别精密吸取20μl注入液相色谱仪，重复进样5次。各浓度峰面积的RSD分别为0.95%、0.55%、0.63%(n=5)。5.3重复性试验取维生素E片10片，按3.2项下方法平行制备6份，分别进样20μl；同时取对照品溶液20μl进样，按外标法测定标示百分含量。测得Vit