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《微生物学遗传育种实验培养基的配制.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、3.牛肉膏蛋白腺培养基NA3（培养细菌用）牛肉膏5g蛋白腺10g酵母浸膏lg蔗糖10g琼脂15~20gpH7.0-7.2水lOOOmL12TC灭菌20mino牛肉膏作用：提供维生素ABC,氮源、碳源等。蛋白脓作用：提供碳源、氮源、生长因子。加琼脂可观察细菌菌落状况。培养基斜面搁置为了扩大接种面积。第一天：2010年9月11日星期六上午9：00-12：00配培养基，灭菌，做斜而，倒平板，制备菌悬液，涂布，培养第二天：2009年9月12H星期日/星期一下午14：00-16：00挑选20-30个有水解圈的菌落到平板（平行2个）；第三天：2009年9月13
2、日星期一7二下午14：00-16：00挑取3・4个水解圈最大的冃标菌落接到斜面保种（每个菌落平行两个保种）准备（每一组）：1、酪蛋白培养基（200ml;lOOml/bottle;2瓶）每组要倒10个酪蛋白平板;2、牛肉膏蛋白月东斜面（50ml;分装10支试管）3、稀释用灭菌水（4.5mldH2O/管，5支试管）4、制备土壤悬液用水（45mldH2O,玻璃珠若干；1瓶）实验步骤：1.采集土样2.培养基1」斜而培养基（自己计算50ml所需的量，也可以儿个组一起配）：牛肉膏蛋白月东培养基：牛肉膏3.0g,蛋lO.Og,NaCl10.0g,H2O1000ml,
3、pH值7.0,琼脂粉15g1.2分离培养基（自己计算200別所需的量，也可以几个组一起配）：酪蛋白培养基：酪素5g（先用0.2N的NaOH充分溶解），牛肉膏3.0g,蛋白陈10.0g,NaCl10.0g,pH7.0〜7.5,H2O定容至1000ml,琼脂粉15.0g,分装2瓶灭菌112°C,30min。1.清洗包扎灭菌1）清洗包扎：平皿，移液管，三角瓶2）配制稀释用无菌水和土壤悬液用水：5支，每支试管中加入4.5ml蒸憎水，塞上试管塞，包扎；取6・8颗玻璃珠加入到装有45ml水的三角瓶中，包扎灭菌3）配制并分装培养基（1）斜面培养基：10支试管（5ml
4、/支）（2）分离培养基：10平皿（20ml/皿）灭菌:112°C,30min2.振荡培养待水放凉，取土样5g加入到装有45ml无菌水的三角瓶（6・8颗玻璃珠）中，37°C震荡培养15mino3.纯种分离（1）制作平板（2）稀释富集培养液至103,10-4,10-5（3）涂布：吸取0.1ml以上三个稀释度菌液，用无菌涂布棒均匀涂布，在平板上标记记号（即每组涂三个）。4.培养：吹干，倒置平皿，37°C培养。5.观察：第二天或者第三天观察菌落周围是否出现透明圈。6.筛选：取另两个分离培养基平板，用记号笔划分为20・30个方格，将出现较大透明圈的菌落分别平行挑
5、接至两个平板对应位置的方格内，标记好记号，37°C培养24或48hr。7.进一步鉴定，取一个平板向平板内菌落间加入少许10%三氯醋酸，过片刻再观察，找出出现较大的明显水解圈，对照另一个平板找出对应的菌落。8.划线：挑出6・8个菌落在剩余的分离培养基平板上划线，每板平分，分别挑两个菌落单独划线。9.挑取确认的单克隆在斜面培养基上划线保种10.实验材料（一）菌种枯草芽泡杆菌株（二）培养基（见附录）⑴完全培养基（CM,20ml液体）：蛋白腺1g,葡萄糖lg,酵母粉0.5g,牛肉膏0.5g,NaCl0.5g,蒸憎水100mL,pH7.2。（2）完全培养基（CM
6、,120ml固体、6个平板）液体培养基中加入2.0%琼脂；这个各组要先配，因为马上要用，各组可以自由结合一起配，按每组150ml,然后分装一瓶20,—瓶130,加入2・6g琼脂。各组至少12:00之前一定要接种，摇床摇2-3个小时，下午要用。前面做好灭菌后再做后面：⑶高渗再生培养基（CMR,100ml,3-5个平板）：蛋白腺1g,葡萄糖1g,酵母粉0.5g,牛肉膏0.5g,NaCl0.5g,蔗糖0.5mol/L（17.1g）,MgCl220mmol/L（0.19g）,琼脂2g,pH7.0,灭菌20mine（4）液体发酵培养基（100ml）：牛肉膏0.3
7、g,蛋白月东l.Og,NaCll.Og,pH自然，H2O定容至100ml.分装两个三角瓶，每瓶50mlo(%1)缓冲液(1)0」mol/L磷酸缓冲液(pH6.0),100ml磷酸二氢钾L5g磷酸氢二钾3.5g(2)高渗缓冲液(10ml)：于磷酸缓冲液中加入0.8mol/L甘露醇(1.46g)。如果在低滲溶液中，因为滲透作用，水分过多进入原生质体导致原生质体破裂。(3)0.9%生理盐水100ml0.9gNaCl7x4.5ml+5x4.5ml,其余装入三角瓶灭菌(%1)原生质体稳定液(SMM)100ml0.5mol/L蔗糖(17.1g)、20mmol/LM
8、gCl2(O」9g)、0.02mol/L顺丁烯二酸(0.2g),调pH6.5o5x4.5ml,
