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1、实验一培养基的配制实验目的1.明确培养基的配制原理。2.掌握配制培养基的一般方法和步骤。实验内容学习细菌、放线菌、酵母菌及霉菌以大类微生物培养基的配制。实验原理培养基是人T配制的适合微生物生长緊殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。备类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。培养细菌常用牛肉膏蛋白豚培养基，培养放线菌常用高氏I号培养基，培养霉菌常用蔡氏培养基或马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基或马铃薯匍萄糖培养基。另外还有固体、液体、加富、选择、
2、鉴别等培养基之分。在这些培养基屮，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。琼脂只是固体培养基的支持物，一般不为微生物所利用。它在96°C以上熔化成液体，而在45C左右开始凝固成固体。在配制培养基时，根据各类微生物的特点，就可以配制出适合不同种类微生物生长发育所需要的培养基。培养基除了满足微生物所必需营养物质外，还要求有一定的酸碱度和渗透压。霉菌和酵母菌的pH偏酸；细菌、放线菌的pH为微碱性。所以每次配制培养基时，都要将培养基的pH值调到一定的范围。牛肉膏蛋白腺培养基配方牛肉膏
3、3.0g蛋白月东lO.OgNaCl5.0g水1OOOmLpH7.4〜7.6高氏I号培养基配方可溶性淀粉20gNaCl0.5gKNO3lgK2HPO4・3H2O0.5gMgSO4・7H2O0.5gFeSO4・7H2O0.0lg琼脂15—25g水1OOOmL马铃薯培养基配方马铃薯(去皮)葡萄糖(或蔗糖)琼脂水自然pH20()g20g15〜25g1000ml察氏培养基配方蔗糖NaNO3K2HPO4KC130g2glg0.5gMgSO4-7H2OFeSO4-7H2O琼脂蒸镭水自然pH实验器材0.5g0.0lg1
4、5〜25g1000ml牛肉膏,蛋白豚,NaCl,琼脂，Imol/LNaOH,lmol/LHCl,KNO3,K2HPO4•3H2O,MgSO4・7H2O,FeS04・7出0,马铃薯，蔗糖等。试管，三角瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，天平，牛角匙，pH试纸(pH5.5〜9.0),棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。实验步骤1.T肉膏蛋东培养基配制方法(1)称量：按培养基配方比例依次推确地称取牛肉膏、蛋白月东、NaCL放人烧杯屮。牛肉育常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面川［屮称量，用热水溶化后倒入烧杯，也可按
5、在称量纸上,称量后育接放入水屮，这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。蛋白豚很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。(2)溶化：在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入己溶的药品屮，再加热溶化，最后补足所损失的水分。在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出
6、容器。同时•需不断搅拌.以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影晌细菌生长。（3）调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH,如果偏酸，用滴管向培养基屮逐滴加入Imol/LNaOH,边加边搅拌,并随时用pH试纸测其pH,直至pH达7.6。反之,用mol/LHCL进行调节。对于冇些要求pH较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行。pH不要调过头，以避免回调而影响培养基内各离子的浓度。配制pH低的琼脂培养基时，若预先调好pH并在高压蒸气下灭菌，则琼脂因
7、水解不能凝固。因此，应将培养基的成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下灭菌，再调整PH。⑷过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利某些实验结果的观察。一般无特殊要求的情况下可以省去（木实验勿需过滤）。⑸分装按实验要求，可将配制的培养基分装人试管内或三角烧瓶内。1）液体分装：分装高度以试管高度的1/4左右为宜。分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的一半为宜，如果是用于振荡培养用，则根据通气量的要求酌情减少;有的液体培养基在灭菌示，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生索等，则装量一定要准确
8、。2）固体分装：分装试管，其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜血。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。3）半固体分装：试管一般以试管高度的1/3为宜，灭菌示垂育待凝。图1-1培养基的分装A漏斗分装装置：B自动分装装置I铁架：2漏斗：3孔胶管：4弹簧夹：5玻璃；6流速调节：7装最调节：8开关分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。⑹加塞图1-2棉塞的制作培养基分装完毕后，在试管口或三角烷瓶口上塞上棉
