实验1 培养基的配制.doc

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1、上饶师范学院自编讲义微生物学实验指导（第一版）叶利民张勇主编上饶师范学院生命科学系2006年9月实验一光学显微镜——油镜的使用2实验二细菌的革兰氏染色4实验三放线菌的形态观察6实验四酵母菌形态观察7实验五霉菌形态观察11实验六培养基的制备实验七高压蒸汽灭13实验八微生物的分离、纯化15实验九微生物大小的测定1719实验十微生物数量的测定实验一光学显微镜——油镜的使用一、实验目的和内容目的：复习艶微镜低倍镜和高倍镜的使用技术，了解油浸系物镜的基本原理，掌握油浸系物镜的使用方法。内容：1.学习油浸系物镜的使用方法。2.用油镜观察大肠杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。二、实验材料和用具大肠杆菌（E.c

2、oli）、金黄色葡萄球（Staphylococcusaureus）的染色装片。香柏油、二甲苯、显微镜、擦镜纸。三、操作步骤（一）观察前的准备1.将显微镜匱于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为4cmo坐止，练习用左眼观察。2.调节光源：将低倍物镜转到工作位置，把光圈完全打开，聚光器升至与载物台相距约1mm左右。转动反光镜采集光源，光线较强的天然光源宜用平而镜，光线较弱的天然光源或人工光源宜用凹面镜，对光至视野内均匀明亮为止。观察染色装片时，光线宜强；观察末染色装片时，光线不宜太强。（二）低倍镜观察染色装片首先上升镜简，将枯草芽抱杆菌染色装片置于载物台上，用标本夹夹住，将观察位置移至物镜止下方

3、，物镜降至距装片0.5cm处，适当缩小光圈然后两眼从目镜观察，转动粗调节器使物镜逐渐上升（或使镜台下降）至发现物像时，改用细调节器调节到物像清楚为止。移动装片，把合适的观察部位移至视野中心。（三）高倍镜观察眼睹离开目镜从侧而观察，旋转转换器，将高倍镜转至止下方，注意避免镜头与玻片柑懂。再山目镜观察，仔细调节光圈，使光线的明亮度适立。用细调节器校止焦距使物镜淸晰为止。将最适宜观察部位移至视野中心，绘图。不要移动装片位置，准备用油镜观察。（四）油镜观察1.提起镜筒约2cm,将油镜转至正下方。在玻片标本的镜检部位（镜头的正下方）滴-滴香柏油。2.从侧而注视，小心慢慢降下镜筒，使油镜浸在油中至油圈不

4、扩大为止，镜头儿乎与装片接触，但不可压及装片，以免压碎玻片，损坏镜头。3.将光线调亮，左眼从目镜观察，用粗调节器将镜筒徐徐上升（切忌反方向旋转），当视野中有物像出现时，再用细调节器校止焦距。如因镜头下降未到位或镜头上升太快末找到物像，必须再从侧而观察，将油镜降下，莹复操作直至物像看清为止。仔细观察并绘图。4.再次观察提起镜筒，换上金黄色葡萄球菌染色装片，依次用低倍镜、高倍镜和油镜观察，绘图。重复观察时可比第一次少加香柏油。（五）镜检完毕后的工作1.移开物镜镜头。2.収出装片。3.清洁油镜，油镜使用完毕后，须用擦镜纸擦去镜头上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯擦掉残留的香柏油，最后再用干净的擦镜

5、纸擦干残留的二甲苯。4.擦净显微镜，将各部分还原。将接物镜呈“八”字形降下，不可使英止対聚光器，同时降下聚光器，转动反光镜使其镜而乖直于镜座°最后套上镜罩，对号放入镜箱中，置阴凉干燥处存放。四、注意事项1.使用油镜必须按先用低倍镜和高倍镜观察，再用油镜观察2.下降镜头时，一•定要从侧面注视，切忌用眼睛对着目镜，边观察边下降镜头的错误操作，以免压碎玻片而损坏镜头。3.使用二甲苯擦镜头吋，注意二甲苯不能过多，以防溶解固定透镜的树脂。4.注意保持显微镜的洁净，对金属部分要用软布擦拭，擦镜头必须用擦镜纸，切勿用手或用普通布、纸等，以免损坏镜头。五、实验报告分别绘出在高倍镜和油镜下观察到的枯草芽泡杆菌

6、及金黄色葡萄球菌的形态，注明物镜放大倍数和总放大率。六、问题和思考1.用油镜便于观察细菌的依据是什么？2.使用油镜应特别注意哪些问题？3.当物镜从低倍镜转到高倍镜和油镜吋，对照明度有何要求？应如何调节？附：油镜的基本原理（一）油镜头的辨认油镜头上常刻有OI（oilimmersion）或HI（homogeneneousimmersion）字样,有的还刻有—圈红线或黑线标记，在低倍物镜、高倍物镜和油镜3物镜中，油镜的放大倍数和数值孔径（numericalaperture）最大，而「1.作距离垠短。（二）显微镜的分辨率显微镜性能的优劣不V是看它的总放大倍数，更重要的是看它分辩率的大小。分辨率是指显

7、微镜能分辨出物休两点间最小距离（D）的能力。D值愈小表明分辨率愈高。D值与光线的波长（X）成止比，与物镜的数值孔径（NA）成反比。D=X/2NA从上式可看出，缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。数值孔径指光线投射到物镜上的垠大角度（称镜口角，a）的一半正弦与介质折射率（n）的乘积；影响数值孔径大小的因数，一•是镜口角，二是介质的折射率。当镜与装片之间的介质为空气时，山于空气＜n=1.52）的折射率不同，光