高效液相色谱法检测食品中防腐剂——乳酸链球菌素.pdf

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1、第5期总第203期2011年5月农业科技与装备AgriculturalScience&TechnologyandEqmpmentNO．5TotalNo。203May．2011高效液相色谱法检测食品中防腐剂——乳酸链球菌素高彩红，宋杰，崔倩，张久娥，耿昕，王建(红梅企业集团品控部。沈阳11(1026)摘要：采用高效液相色谱仪(配紫外榆测器)．选择c。。柱，检测波长为220am，以梯度洗脱检测乳酸链球菌素的含量。试验证明，标准曲线有较好的线性关系，该方法回收率达95％。RSD<3．0％．精密度高。关键词：高效

2、液相色谱；防腐剂；乳酸链球菌素中图分类号：TS202．3’文献标识码：A文章编号：1674—1161(20l!)05-0026-03随着人们生活质量的日益提高和环境保护意识的增强，化学防腐剂的毒性和残留问题也愈加得到重视。目前，乳酸链球菌素作为一种新型天然的生物防腐剂，较之传统防腐剂苯甲酸钠、山梨酸钾、丙酸盐、富马酸二甲酯。具有效果好、用量少、对人和生物生存环境没有破坏和副作用等优点。乳酸链球菌素也称乳酸链球菌肽(NISIN)，是乳酸乳球菌乳酸亚种的部分菌株产生的一种短肽．它可有效地杀死芽孢和革兰氏阳性菌

3、的营养细胞。由于其在人体肠道能被蛋白酶酶解．因此对人体安全无副作用，是一种安全、绿色、环保的防腐剂。迄今为止，NISIN已在世界60多个国家和地区广泛使用。NISIN的检测方法分为液体检测法和固体检测法。NISIN定量分析的最初方法为1934年CoxGA等人建议采用的甲基蓝还原法．后来卡H继开发了生物分析法，包括试管稀释法(TobeDilution)、浊度分析法(TurbidityAs—says)、琼脂扩散法(AgarDifusion’Test)、ATP生物发光测定法(ATPBioluminometry)

4、、绿色荧光蛋白测定法(GFP—bioassy)和微量滴定法(Mi．crotitration)等。其中最普遍的是琼脂扩散法(ADT)。Tramer和Fowler于1964年建立了琼脂扩散法的基本方法。WolfandGibbons(1996)改进了琼脂扩散法．对指示菌、琼脂的浑度和强度、Tween20的浓度、培养中所加的缓冲剂进行了优化．与Trainer等的方法相比精确度提高了57％，准确度提高了12％。为了消除标准品和样品所产生差异对测定的影响，辛字等对收稿日期：201l埘一2I作者简介：高彩红(1981一

5、)，女，助理工程师，从事食品防腐剂与质量控制方面的研究。二剂虽法的主要影响因素进行了研究，确定了效价计算的C++运算程序．提高了测定乳酸链球菌素效价的准确性。目前，琼脂扩散法仍是研究和生产中测定NISIN效价的主要方法，但这种方法操作繁琐，费时费力。准确性、精确性及试验的重复性不是很理想。因此，建立食品中防腐剂——乳酸链球菌素快速准确的检测方法具有重要意义，1材料与方法1．1原理试样制备混匀后。经离心机离心、微孔滤膜过滤后，用高效液相色谱仪测定，采用外标法定量计算出样品的浓度。1．2试剂与设备乙腈；三氟乙

6、酸；液相专用纯化水或娃哈哈纯净水：N1SIN标准品(SIGMA—ALORICH)。高效液相色谱仪(HPLC)．配紫外检测器和色谱工作站(CBM一102)；分析天平，感量0．000lg；离心机，转速不低于4000r／min；具塞塑料离心管；砂芯过滤装置：真空泵。1．3试样处理1．3．1固体样品称取一定量的样品(精准到0．0001g)，用液相专用水混匀，倒入50mL具塞塑料离心管中。以8000r／min离心20nfin，取上清液经孔径O．45p,m的微孔滤膜过滤后，供高效液相色谱测定。1．3．2液体(发酵液)

7、下罐发酵液用0．2mol／L盐酸调节pH为3．0，倒入具塞塑料离心管中，以8000r／min离心20rain，取上清液经孔径0．45p,m的微孔滤膜过滤后，备用。1．4测定1．4．1色谱条件色谱柱：C18柱，4．6mmx250lllln。流动2011年第5期高彩红等：高效液相色谱法检测食品中防腐剂——乳酸链球茵素27相：A(10％乙腈，0．1％三氟乙酸)；B(90％乙腈，0．07％三氟乙酸)。洗脱条件：0～8min，B15％；8—35rain，B由15％升至40％；35—55min，B85％；55rain

8、后，B15％平衡，准备下一次采集数据。流速：1mL／min。进样量：10斗L。波长：220nm。柱温：25℃。1．4．2标准曲线绘制称取264．7mgSIGMANISIN样品，以pH=3的液相专用水溶解。分别稀释配制成效价为5294．0IU／mL、6352．7IU／mL、7411．6IU／mL、8470．4IU／mL、10588IU／mL的溶液。经孔径0．45ttm微孔滤膜过滤后，由低浓度向高浓度依次进行检测．得到的峰面积分别