高效液相色谱法检测食品中防腐剂——乳酸链球菌素

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1、高效液相色谱法检测食品中防腐剂——乳酸链球菌素第5期总第203期2011年5月农业科技与装备AgriculturalScience&TechnologyandEquipmentNO.5TOtalNo.2O3M.2011高效液相色谱法检测食品中防腐剂——乳酸链球菌素高彩红,宋杰,崔倩,张久娥,耿昕,王建(红梅企业集团品控部,沈阳i10026)摘要:采用高效液相色谱仪(配紫外检测器),选择C,.柱,检测波长为220nm,以梯度洗脱检测乳酸链球菌素的含量.试验证明,标准曲线有较好的线性关系,该方法回收率达95%,RSD<3.o%.精密度高.关键词:

2、高效液相色谱;防腐剂;乳酸链球菌素中圈分类号:TS202.3文献标识码:A文章编号:1674一l161(2011)05-0026—03随着人们生活质量的日益提高和环境保护意识的增强,化学防腐剂的毒性和残留问题也愈加得到重视.目前,乳酸链球菌素作为一种新型天然的生物防腐剂,较之传统防腐剂苯甲酸钠,山梨酸钾,丙酸盐,富马酸二甲酯,具有效果好,用量少,对人和生物生存环境没有破坏和副作用等优点.乳酸链球菌素也称乳酸链球菌肽(NISIN),是乳酸乳球菌乳酸亚种的部分菌株产生的～种短肽,它可有效地杀死芽孢和革兰氏阳性菌的营养细胞.由于其在人体肠道能被蛋白酶酶解,因此对

3、人体安全无副作用,是一种安全,绿色,环保的防腐剂.迄今为止,NISIN已在世界60多个国家和地区广泛使用.NISIN的检测方法分为液体检测法和固体检测法.NISIN定量分析的最初方法为1934年CoxGA等人建议采用的甲基蓝还原法,后来相继开发了生物分析法,包括试管稀释法(TobeDilution),浊度分析法(TurbidityAs—says),琼脂扩散法(AgarDifusionTest),ATP生物发光测定法(ATPBioluminometry),绿色荧光蛋白测定法(GFP—bioassy)和微量滴定法(Mi—crotitration)等.其中最普遍

4、的是琼脂扩散法(ADT).Tra.met和Fowler于1964年建立了琼脂扩散法的基本方法.WolfandGibbons(1996)改进了琼脂扩散法.对指示菌,琼脂的浑度和强度,Tween20的浓度,培养中所加的缓冲剂进行了优化,与Trainer等的方法相比精确度提高了57%,准确度提高了12%.为了消除标准品和样品所产生差异对测定的影响.辛宇等对收稿日期:2011-04—21作者简介:高彩红(1981一一),女,助理工程师,从事食品防腐剂与质量控制方面的研究.二剂量法的主要影响因素进行了研究,确定了效价计算的c++运算程序,提高了测定乳酸链球菌索效价的

5、准确性.目前,琼脂扩散法仍是研究和生产中测定NISIN效价的主要方法,但这种方法操作繁琐,费时费力,准确性,精确性及试验的重复性不是很理想.因此.建立食品中防腐剂——乳酸链球菌素快速准确的检测方法具有重要意义.1材料与方法1.1原理试样制备混匀后.经离心机离I='?,微孔滤膜过滤后,用高效液相色谱仪测定,采用外标法定量计算出样品的浓度.1.2试剂与设备乙腈;三氟乙酸;液相专用纯化水或娃哈哈纯净水:NISIN标准品(SIGMA～ALORICH).高效液相色谱仪(HPLC),配紫外检测器和色谱工作站(CRM一102):分析天平,感量0.000】g:离心机,转速

6、不低于4000r/rain;具塞塑料离心管;砂芯过滤装置:真空泵.1.3试样处理1.3.1固体样品称取一定量的样品(精准到0.000lg),用液相专用水混匀,倒入50mL具塞塑料离心管中,以8000r/min离心20mitl,取上清液经孔径0.45m的微孔滤膜过滤后,供高效液相色谱测定.1.3.2液体(发酵液)下罐发酵液用0.2mol/L盐酸调节pH为3.0,倒入具塞塑料离心管中,以8000r/min离心20min,取上清液经孑L径0.45H的微孔滤膜过滤后,备用.1.4测定1.4-1色谱条件色谱柱:cj8柱,4.6mmx250lnn-i.流动2011年第

7、5期高彩红等:高效液相色谱法检测食品中防腐剂——乳酸链球菌素27相:A(10%乙腈,0.1%三氟乙酸);B(90%乙腈,0.07%三氟乙酸).洗脱条件:0～8min,B15%;8-35min,B由l5%升至40%;35～55rain,B85%;55min后,B15%平衡,准备下一次采集数据.流速:1mL/min.进样量:10L.波长:220nm.柱温:25℃.1.4.2标准曲线绘制称取264.7mgSIGMANISIN样品,以pH=3的液相专用水溶解,分别稀释配制成效价为5294.0IU/mL,6352.7IU/mI,7411.6IU/mL,8470.4I

8、U/mL,10588IU/mL的溶液,经孔径0.45m微孔滤膜过滤