实验6微生物液体深层培养-发酵罐的使用.ppt

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1、CentralLaboratoryofBiology实验六微生物液体深层培　养—发酵罐的使用微生物学实验目的要求与基本原理【目的要求】1.了解微生物液体深层培养的方法和设备的使用。【基本原理】好氧微生物的生长繁殖需充足的氧。为了进行大规模的工业生产，微生物需进行液体深层培养，其氧的供给由空气系统完成，“通风搅拌”是最常用的方式。生产前，空气过滤器至罐体以及其他与罐体相通的管道、培养基都需进行彻底地灭菌。然后，控制好微生物培养所需的温度、风量、搅拌速度并接种，方可正常生产。【实验用品】1.材料：玉米粉、豆饼粉

2、2.试剂：K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H20、红曲霉液体菌种3.仪器：小型通风发酵罐【方法步骤】1.准备工作1）培养基的配制：玉米粉5%，豆饼粉2%，K2HPO4·3H2O0.5%，MgSO4·7H200.1%，pH自然。2）检查本系统各单件设备，确保各设备能正常运行时方可开机。3）温度、pH、转速、消泡设定值的调节【方法步骤】2.空气过滤及空气管路的消毒1）慢慢打开蒸汽阀门，排尽冷凝水。2）蒸汽通过空气过滤器进入发酵罐内。3）消毒时间一般为30分钟。4）吹干空气过滤器需20分钟左右。3.空消1）

3、排尽夹套中的水。2）排尽蒸汽管中冷凝水，使蒸汽徐徐进入发酵罐。3）空消时间一般为30～50分钟。排尽发酵罐内的冷凝水。4.加培养基液1）将培养基原液加入发酵罐内，并加水至所配培养液总量的75～85%左右。5.实消1）排尽夹套中的水。2）夹套预热：调节电机转速至150rpm左右，进行慢速搅拌。3）发酵罐内温度达到80℃左右时，排尽蒸汽管中冷凝水，使蒸汽徐徐进入发酵罐。4）当培养液温度达到95～100℃后方可停止搅拌。5）实消时间一般为30分钟。自然冷却10分钟左右。6）通冷却水进行冷却。7）当罐内温度降至70

4、℃以下时，慢速搅动培养基。【方法步骤】6.接种1）当发酵液温度降到接种温度时即可进行接种。2）准备合格的摇床菌种。3）在接种口四周围上酒精棉。4）点燃酒精棉，拧下接种口螺母，并将其放入预先准备的盛有酒精的培养基中。5）将装菌种的瓶口在火焰上烧一会儿，在火焰下拔下瓶塞，迅速将菌种倒入发酵罐内，盖上接种口螺母，灭火焰。【方法步骤】7.培养1）按照工艺要求调节通气量、培养温度及搅拌转速。8.取样蒸汽通过取样口，保持20～30分钟，消毒后再取样。取完样再通蒸汽约5min。9.出料1）出料管的灭菌。2）出料。3）出料

5、完毕后用蒸汽消毒出料管。4）发酵罐应及时清洗干净。5）如果发酵罐暂时不用，则需排尽罐内及各管道内的余水。【方法步骤】10.发酵罐的清洗1）关闭电源，旋下电机及个传感器的连线插头。2）如果搅拌轴及机械密封装置不干净，则可用水冲刷。3）安装完毕后，检查管道及发酵罐的密封性。【方法步骤】【注意事项】1）必须确保所有单件设备能正常运行时使用本系统。2）在过滤器消毒时，流经空气过滤器（金属滤芯）的蒸汽压力不得超过0.17MPa，否则过滤器滤芯会被损坏，失去过滤能力。3）在操作过程中，罐压不得超过0.12MPa，防止引

6、起设备的损坏。注意：在空、实消升温过程中冷却按钮必须处于停止状态，否则当设定值设定在培养温度时，冷却水管中会自动通冷却水，不仅会影响升温速度、浪费蒸汽，更重要的是会引起冷凝水过多，造成培养液的浪费。4）在空、实消结束后冷却时，发酵罐内严禁产生负压，以免损坏设备或造成污染。5）在发酵过程中，罐压应维持在0.03～0.05MPa之间，以免引起污染。在各操作过程中，必须保持空气管道中的压力大于发酵罐的罐压，否则会引起发酵罐中的液体倒流到过滤器中，堵塞过滤器芯或失去过滤能力。【注意事项】【实验报告】1.以自己的理解

7、写出发酵罐使用的基本流程。2.思考题1）怎样防止由通风引起的发酵液污染？CentrallaboratoryofBiology生物学实验教学中心Thanksforyourattention!