微生物的实验培养.ppt

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1、微生物的实验室培养专题2:微生物的培养与应用了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光合作用.一、微生物基础知识微生物植物界动物界原核生物界原生生物界真菌界病毒界霉菌酵母菌食用菌细菌蓝藻放线菌支原体衣原体列克次体生物1、微生物2、菌落单个或少数

2、细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落特征因种而异二、培养基培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料。不同的微生物所使用的培养基成分是不尽相同的。1.培养基含义2.培养基的成分水分：无机盐：碳源：有机碳（糖等）无机碳（CO2、CO32-等）提供C元素，有机碳也能提供能量氮源：有机氮（蛋白质等）无机氮（N2、NO2-、NO3-、NH4+等）有机氮（蛋白质等）无机氮（N2、NO2-、NO3-、NH4+等）提供N元素，有机氮还能提供C元素、且能提供能量生

3、长因子：微生物生长所必须的，自身又不能合成的有机小分子物质。氨基酸、核苷酸、维生素、碱基等。（1）按物理状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能来分：可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分：可分为天然培养基和合成培养基。3.培养基的种类液体培养基：主要用于工业生产表面生长均匀混浊生长沉淀生长半固体培养基：观察微生物的运动无运动有运动(弥散)固体培养基：主要用于微生物分离、鉴定、计数和保藏常见的选择培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无

4、氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。合成培养基:天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：营养成分丰富，培养效果好缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;天然培养基：三、无菌技术1.无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的

5、方法。无论是倒平板、平板划线操作，还是稀释涂布平板法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。主要包括以下几个方面：（教材P15）只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。利用较温和的化学或物理方法，杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）的过程。2.消毒与灭菌的概念及两者的区别(2)灭菌的定义用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌的过程。(1)消毒的定义灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。1)煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2)巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或8

6、0℃下煮15min3)化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4)紫外线消毒……(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法1)灼烧灭菌2)干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3)高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(2)灭菌的方法：1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染

7、。答：（1）（2）需要灭菌；（3）需要消毒。旁栏思考3.微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养基的配制3、培养基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养7、菌种的保存1、培养基配制（1）原则1）目的明确：要根据微生物和种类、培养目的等选择原料，配制培养基。2）营养要协调：各种营养物质要保证适当的浓度和比例。3）PH值要适当：不同微生物生长所需PH值不同。四、实验操作（2）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）（3）配制过程１）计算２）称量３）溶化４）灭菌５）倒平板倒平板技术1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法

8、来估计培养基的温度？问题