微生物的实验室培养.ppt

《微生物的实验室培养.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、高二年级生物专题二微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养倒平板技术3、微生物的接种技术纯化大肠杆菌平板划线法稀释涂布平板法科赫的稀释—划线分离培养法连续划线法分区划线法分区划线法分区划线法划线分离时平板分4个区，故又称四分区划线法。其中第4区是单菌落的主要分布区，故其划线面积应最大。为防止第4区内划线与1、2、3区线条相接触，应使4区线条与1区线条相平行，这样区与区间线条夹角最好保持120度左右。先将接种环蘸取少量菌在平板上1区划3-5条平行线，取出接种环，左手关上皿盖，将平板转动60～70度。灼烧接种环，待在平板边缘上冷却后，再按以上方法以1区划线的菌体为菌源，

2、由1区向2区作第2次平行划线。第2次划线完毕，同时再把平皿转动约60～70度，同样依次在3、4区划线。划线完毕，灼烧接种环，关上皿盖，倒置于37℃恒温箱中培养24h后，在划线区观察单菌落。系列稀释操作菌落是鉴定菌种的重要依据。细菌的菌落有鞭毛细菌：无鞭毛细菌：有荚膜细菌：无荚膜细菌：大肠杆菌在伊红美蓝培养基上形成深紫色，并带有金属光泽的菌落。菌落光滑,S型菌落粗糙,R型大而扁平，边缘波状或锯齿状。较小较厚，边缘整齐。1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保存。2、长期保存：甘油冷冻管藏法5、菌种的保存微生物的类群病毒界原核生物界（如细菌、放线菌等）

3、原生生物界真菌界（如酵母菌、霉菌等）细胞壁细胞膜细胞质(核糖体、质粒等)拟核一般结构特殊结构荚膜、鞭毛、芽孢细菌的结构牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000ml。培养基的配制培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基1.计算2．称量3．溶化4．灭菌5．倒平板二、微生物需要的营养物质元素细菌酵母菌霉菌碳5049.847.9氢86.76.7氧2031.140.2氮1512.45.2磷3————硫1————微生物的化学组成碳源氮源生长因子无机盐水微生物需要的营养物质二、微生物需要的营养物质培养基的配

4、制人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。固体培养基液体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基选择培养基根据培养基的物理性质分固体培养基—用于微生物的分离、计数、鉴定半固体培养基—观察微生物的运动,鉴定菌种液体培养基—常用于工业生产三、培养基的种类理想的凝固剂应具备以下条件：不会被微生物分解利用；不会因高温灭菌而受到破坏；在微生物生长的温度范围内保持固体状态；对微生物及操作人员均无毒害作用；透明度好、凝固力强；价格低廉，配制方便。培养基的种类常用的凝固剂——琼脂主要成分是硫酸半乳聚糖熔点为96℃凝固点为40℃透明度强。根据培养基的化学成分分合成

5、培养基—成分明确,常用于分类,鉴定天然培养基—成分不明确,常用于工业生产培养基的种类天然培养基和合成培养基的优劣点：---天然培养基---优点：具有营养丰富、原料易得、配制方便、价格低廉、培养微生物效果好等。---缺点：是培养基中营养成分以及微生物对各种营养物质的需要量难以确定，实验结果的重复性差。---合成培养基---优点：营养成分含量准确，因而实验的可重复性强。---缺点：配制烦琐、成本较高、微生物生长缓慢。培养基的种类根据培养基的用途分选择培养基——在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基——在培养基中加入某种

6、指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。培养基的种类选择培养基加入青霉素的培养基加入高浓度食盐的培养基不加氮源的无氮培养基不加含碳有机物的无碳培养基加入青霉素等抗生素的培养基分离酵母菌、霉菌等真菌分离金黄色葡萄球菌分离固氮菌分离自养型微生物分离导入了目的基因的受体细胞①目的要明确---根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制培养基的配制原则①培养微生物的种类－－自养还是异养②培养目的－－用于生产还是用于科学研究②营养要协调---注意各种营养物质的浓度和比例,最重要为碳源和氮源的比。如：谷氨酸生产中C:N=4:1，菌体数↑谷氨酸↓；C:N=3:1，菌体数↓谷氨酸↑。

7、培养基的配制原则③pH要适宜细菌：pH6.5～7.5放线菌：pH7.5～8.5真菌：pH5.0～6.0培养基的配制原则1、消毒和灭菌的区别？2、常用的消毒方法有哪些？3、常用的灭菌方法有哪些？4、请判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。A.培养细菌用的培养基或培养皿。B.玻棒、试管、烧瓶和吸管。C.接种环、接种针。D.实验操作者的双手。无菌技术消毒使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。一、无菌技术常用的消毒方