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1、糙皮侧耳液体深层培养条件的优化洪钦辉，郭桂珊，黄雨杏(华南农业大学食品学院生物工程，广州510642)摘要：对粤西地区的荫种资源进行野外采集，通过对苘种的鉴定和分离培养，选取能产生漆酶的糙皮侧耳进行液体深层发酵，丼对发酵工艺进行优化。结果表明：糙皮侧耳液体培养的蝻佳培养菽配方为：葡细糖1%，玉米粉4%,酵母膏0.7%,硝酸铵0.5%,KH2PO40.1%,MgSO4*7^00.05%;最佳培养条件为:培养基装景120mL/bottle,摇床转速120r/min,pH5.4,温度25°C。在此培养条件卜‘，糙皮侧环牛长较好且表现出较岛的分泌漆酶的能力。关键词：糙皮
2、侧耳；漆酶；液体培养；培养条件食用菌含有丰富的蛋白质、脂肪、维生素和碳水化合物，是营养丰富的天然食品，数据表明，食用菌的蛋D质含量分别比芦笋和卷心菜高2倍、比柑橘高4倍、比苹果高12倍；按干重计算，食用菌通常含有19%〜35%的蛋白质，高于其他大多数食物甚至包括牛奶。而且食用菌含宥人类所必需的18种氨基酸，各种食用菌中赖氨酸的含量都很高。除了普通氨基酸和酰胺之外，食用蔺还含冇不常见的氨基酸和相关的氮化合物。食用菌屮含有高比例的非饱和脂肪酸，也是其作为健康食品的重要因素之一。此外，食用菌还富含多种矿物质、维生素、游离氨基酸、多糖、多肽和生物碱等活性成分，因而食用菌
3、还具有抗肿瘤、降血脂、抗病毒和免疫调节等多种药理作用。因此，开发和利用食用菌资源其宥广阔的应用前景。糙皮侧耳因载培技术易掌握，产量高，我网近年来的栽培面积大幅度增长，其产量都居全W食用菌产量首位，但目前糙皮侧耳的生产主要是进行固体基质培养，存在生长周期长、菌龄不一致、规模化程度小的特点，而采用液体深层发酵可以使生产规模化、工厂化，并且其宥菌龄整齐、生长周期短的优点。漆酶(Laccase)是很早就被认识的一类含Cu原子的多酚氧化酶，广泛存在于真菌屮，它与木质素氧化物酶(Ligninperoxidase)和猛过氧化物酶(Manganeseperoxidase)都是参
4、与木质素降解的关键酶。漆酶主要攻击木质素的苯酚结构单元，可直接与木质素底物相互作用，也可在中间氧化调节物质存在卜*,与广泛的底物作用。漆酶町用于纸浆漂白、污水去毒、从酒中除去酚类物质以及抗菌素和类固醇的改造等，因而具有重要的应用价值。木文就糙皮侧耳的培养条件对产漆酶的影响做初步研究和分析。1材料和方法1.1基础培养基1.1.1固体培养基（PDA培养基）马铃薯20g,蔗糖1.5g，琼脂2g,水lOOmL,自然pH1.1.2液体培养基蔗糖2g，玉米粉3g（煮汁），麦麸3g（煮汁），酵母粉O.3g，KH2PO4O.lg,MgSO4•7H2O0.05g,水lOOmL，p
5、H6.01.2培养方法1.2.1菌种固体扩大培养将菌种从保存斜面接种到PDA培养基平板上，25"C恒温培养7d得到平板母种。1.2.2摇瓶种子培养将闷体母种分割成小块，每瓶接入四块稍带培养基的母种（如蚕豆大小），25'C,150r/min振荡培养。1.2.3摇瓶扩人培养将得到菌种以10%的接种量转接到各处理摇瓶屮。通过单因素实验和正交实验确定最优化的培养基配方和培养条件。1.3测定方法1.3.1茼球直径的测定取ImL发酵液于培养皿屮用水稀释10倍，随机取10个菌球在培养皿屮排成一行，用游标卡尺测定总长度。（3次取平均）1.3.2菌球数量的测定取ImL发酵液于培养
6、皿中稀释10倍，于培养皿下垫置方格纸计数。（3次取平均）1.3.3菌丝体生物量的测定生长&好、无污染的摇瓶培养物于4000r/minK离心15min，取沉淀物称鲜重即为菌丝体生物量。重复3次取平均值。1.3.4漆酶的活性测定111酶液的制备：取发酵液，4000r/min离心15min,取上清液。0.5mL3.36mmol/L临联中苯胺+3.4mL0.1mol/LPH4.6醋酸盐缓冲液+0.1mL粗酶液。28°C恒温水浴保温30min,测定A600。以每分钟OD值增加0.01为一个酶活单位。1.3.5蛋白质浓度的测定：紫外吸收法121取ImL粗酶液，用蒸馏水稀释2
7、5倍，摇匀比色，测A280、A260,以蒸馏水做空0样。蛋白质含量(mg/mL)=(1.45A280-0.74A260)X251.4培养条件优化组合实验1.4.1碳源单因素实验以酵母膏1%为氮源，KH2PO40.1%、MgSO4•7H2O0.05%为无机盐，对葡萄糖、蔗糖、麦麸、玉米粉四种碳源2%进行单因素对比实验，选择两种对生长最好、产漆酶最多的做正交实验。其屮麦麸、玉米粉煮沸30min,八层纱布过滤，取其滤液备用，下同。以玉米粉2%为碳源，KH2PO40.1%、MgSO4•7H2O0.05%为无机盐，对酵母膏、黄豆粉、硫酸铵、硝酸铵四种氮源1%进行单冈素对比
8、实验，选择两种对生K最好
