多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程.doc

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1、多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程目的：建立多糖的分子量与分子量分布测定的标准操作规程。2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。3.范围：适用于药品中多糖的分子量与分子量分布的测定。4.职责：QC检验员对本标准的实施负责。5.程序：5.1.对仪器的一般要求：色谱柱为测多糖专用凝胶柱（按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱）。检测器为示差折光检测器。5.2.系统适用性试验：按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数（n）和供试品在该分析状态下的分配系数（Kd）应达到规定的要求。Kd=tR—t0tT—t0式中tR为供试品峰

2、的保留时间；t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间。tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。5.3.测定法：5.3.1.系统校正：根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品（常用的为葡聚糖）分别用流动相制成每1ml中约含10mg的标准溶液，分别取上述标准溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。由GPC专用软件绘制标准曲线，得线性回归方程：1gMW=a+btR式中MW为标样的已知重均分子量；tR为标样的保留时间。5.3.2.样品测量：取供试品溶液25µl注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算

3、分子量：Mn=ΣRIi/Σ（RIi/Mi）Mw=Σ（RIiMi）/ΣRIiD=Mw/Mn式中Mn为数均分子量；RIi为为样品i级分的物质量，即供试品在保留时间i的峰高；Mi为样品i级分的分子量，即供试品在保留时间i的分子量。5.4.结果处理：采用GPC专用软件，可获得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各时间点的分子量（片段数据）和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。仪器使用记录XXXXXXXX编号：ZL009200日期检验内容使用时间仪器状态使用人