《多糖分子量测定》PPT课件.ppt

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1、多糖的分子量测定是研究多糖性质的一项较为重要的工作。多糖的性质往往与它的分子量大小有关。例如，多糖溶液的粘度不但随浓度的增大而升高，而且与多糖分子量大小有关。一般说来，分子量增大，粘度增高。在生物学研究中，发现某些多糖由于分子量大小方面的差别，所产生的某些效应也有一定差异。第5章多糖的分子量测定Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.由于不同分子量大小的多糖具有不同的性质，在多糖的应用中，如以其作为试剂使用于某些实验时，往往需要在

2、它的分子量大小方面作选择。可见,不论在多糖性质的研究，或是在它的用途等方面，都涉及分子量方面的问题，往往需要测定它的分子量。因而测定分子量成为研究和制备多糖的一项经常性工作。第4章多糖的干燥和纯度鉴定Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.测定多糖分子量时，为了避免因存在杂质而影响测定结果，需要把检测的样品(简称样品或检样)适当提纯。用于分子量测定的样品，纯度要求虽然不十分高，但至少要达到:(1)去除杂质和水分。(2)把不同化学结

3、构的组分相互分开，使它们在测定分子量中不相互干扰。(3)把不同分子量大小的组分相互分开。另外,在用某些方法进行分子量测定时，需要先将小分子量的盐和单糖除去。第4章多糖的干燥和纯度鉴定Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.一、渗透压法：利用膜渗透压计(MembraneOsmometer，简称MO仪)可以测定范围在1万～50万之间的多糖分子量。本法不需用标准品.[原理]:把多糖水溶液装在半透膜制成的透析袋内，袋外为溶剂(水)，水分子

4、可以自由通过半透膜，多糖分子则不能通过透析膜，因此袋内的多糖分子必将吸引更多的水分子渗入袋内，形成一定的渗透压。渗透压与溶液中的溶质分子数有关，可以用范特荷甫公式表示，即πV=nRT(1-1)式中π——渗透压；V——溶液体积；n——溶液摩尔数；R——气体常数；T——绝对温度。第4章多糖的干燥和纯度鉴定Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.因n=W/M，W=CV,代人上式简化后得:M=RT/(π/C)(1—2)C:浓度有些研究者认

5、为应当考虑溶剂在不同温度时的密度D，即M=RT/(π/c*D)(1—3)D:密度[仪器和试剂]本试验采用的膜渗透压计为德国Knauer公司的膜渗透仪.与该公司特制的专为测定水溶性物质用的双层膜作为半透膜,溶剂为脱气蒸馏水。膜渗透仪的主要部件是渗透池,由半透膜分隔成上下两池,下池底部中央有一压敏换能元件。操作时先将下池充满纯水，加上半膜后再将上池充满测定的溶液。在恒温条件下使两池达成平衡，压力之差由换能器输出信号放大后记录，求得π值.第4章多糖的干燥和纯度鉴定Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0

6、.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.膜渗透压计示意图第4章多糖的干燥和纯度鉴定Evaluationonly.CreatedwithAspose.Slidesfor.NET3.5ClientProfile5.2.0.0.Copyright2004-2011AsposePtyLtd.[操作]以右旋糖酐分子量的测定为例。(1)仪器准备：将脱气后的蒸馏水充满下池。浸泡好的半透膜覆盖其上并注意勿使气泡进入。将上池压紧。按操作要求逐步旋紧中心螺丝(约8小时)，装上针阀及校正杯进行仪器校正(约12小时)，取下针形阀及校正杯，装上进样管，用溶剂充分冲洗后，开动记录仪，划出基

7、线(约12小时)。(2)样品准备：每一测定的样品需配3～5个不同浓度的溶液。本试验中用右旋糖酐配制成O.209g／100mL(C1)，O.403g／100mL(C2)及O.626g／lOOmL(C3)3种浓度的溶液。(3)样品测定：先用浓度为C1的样品由进样管注入上池，清洗3次，再注满进行测量，直到记录仪达到平衡。划出的直线与基线之间的距离即为该浓度溶液的π值。同法测定C2，C3溶液的π值。第4章多糖的干燥和纯度鉴定Ev