[精品]实验2 培养基配制与灭菌.doc

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1、实验2培养基配制与灭菌一、实验H的学习培养基配制与灭菌的操作方法。二、实验用具和药站台秤(感量0.2・0.5g)、烧杯(300mL>500mL)、三角瓶(5OmL)、量筒(500mL、50mL)、移液管、玻璃漏斗、玻璃棒、玻璃铅笔、pH值试纸、橡皮吸球、线绳、包头纸、石棉网。蔗糖、琼脂、INNaOH、1NHC1、各种培养基母液。三、实验方法(%1)培养基配制每组配制培养基300mL。(1)每纽取50mL烧杯一只，用50mL量筒取大量丿匸素30mL,分别用移液管吸取微量元素0.3mL,铁盐1.5mL、维生素B10」2mL、维生素B60.15mL、烟酸0

2、.15mL>甘氨酸0.3mL、肌醇1.5mL和激素类(浓度临时确定),置于烧杯屮备用(注意：移液管不能混用)。(2)每组取300mL烧杯一几用量筒取300mL蒸锚水倒人烧杯屮。用玻璃铅笔划好液位线，再将蒸憾水倒出一半。称琼脂2.4g倒人烧杯屮，再称蔗糖6g备用。将加入琼脂的烧杯放在石棉网的文火上煮沸，煮吋常用玻璃棒搅动，待琼脂溶化后加入蔗糖。蔗糖溶解后，将早已吸好的大量元索、微量元索、铁盐有机物及激素的混合液倒入烧杯屮，将装好混合液的烧杯用蒸镭水洗三次，倒入500ml烧杯屮，加热片刻(注意不要煮沸)，将烧杯离火，加蒸懈水定容至液位线。(3)用INNa

3、OH或1NHC1将pH值调至5.8。调吋应用玻璃棒不断搅动，并用pH值试纸测试pH值。(4)用玻璃漏斗，将300mL培养基分注于10只三角瓶屮，每瓶约30mL。分注培养基吋，不可将培养基倒在三角瓶内、外壁上。(5)封好瓶，在包头纸上写明培养基代号，扎好线绳。(%1)培养基的灭菌培养基小含有大量的有机物，特别含糖量较高，是各种微生物滋生、繁殖的极好场所。而接种材料需要在无菌条件下培养很长吋间，如果培养基被微生物所污染，便达不到培养的预期结果。因此，培养基的灭菌，是植物组织培养屮十分重要的环节。培养基灭菌的方法有多种，我们这里主要用的是高压蒸气灭菌法。高

4、压蒸气灭菌法：把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸憾水等，放人高压灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加水，水位高度不超过支柱高度。盖好锅盖，上好螺丝。加热后，锅上压力表指针开始移动，肖指针移至0.5kg/cm2Dt，扭开放气阀门排除冷空气，使压力表指针回复零位。关好放气阀门继续加热。当指针移至1.1—1.2kg/cm2时,将火调小，保持该压力15-20min(在122-124°C下保持15—20min),即可达到消毒Fl的。高压蒸气灭菌注意事项：⑴锅内冷气必须排尽，否则压力表指针虽达到一定压力，但由于锅内冷空气的存在并达不到应有的温度，因而影响灭菌效果

5、。(2)为达到一•定压力后，注意在保持压力过程屮，严格遵守时间，吋间过长会使一些化学物质遭到破坏，影响培养基成分，吋间短则达不到灭菌效果。(3)三角瓶屮的液体不超过总体积的70%,否则当温度超过100°C吋，培养基会喷溢，造成培养瓶壁和包头纸的污染。