[精品]培养基的配制与湿热灭菌1.doc

《[精品]培养基的配制与湿热灭菌1.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实验二培养基的配制与湿热灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。2.学习常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。3.进一步熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。二、实验材料1•药品及试剂:NaOH,琼脂，牛肉膏,蛋白腺,NaCl2•仪器及其它：试管、烧杯、量筒、玻棒、天平、药匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（5、5-9、0）、牛皮纸、记号笔、麻绳、培养皿、涂布棒、枪头、玻璃珠三、实验内容和方法（一）实验内容配制牛肉膏蛋白豚培养基配方：牛肉膏3g、蛋白腺10g、NaCl5g、水1000ml.琼脂15-25g、pH7.0-7.2

2、（二）方法步骤1.称量2•熔化3•调pH4.分装按培养基配方比例依次准确地称取药品，混匀示加入琼脂。在沸水浴锅屮加热熔化。用lmol/LNaOH调pH至7.0-7.2。将溶化的固体培养基趁热加至漏斗上，装试管时，注意管口不要沾上培养基。液体分装装量不超过试管的1/4o5•加棉塞培养基分装完毕示，在试管口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能，然后包扎一层牛皮纸。试管应先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮纸，贴上标签，注明培养基名称、口期、组别。6.灭菌将培养基放入高压蒸汽灭菌锅内，121°C,20min湿热灭菌。7•摆斜面灭

3、菌完毕，将试管培养基冷至50C左右，将试管棉塞搁在玻棒（或木棍）上,搁成斜面，搁置的斜血长度以不超过试管总长度的一半为宜。冷却后备用。8、倒平板将消后培养基冷却到55-56C,倒入无菌的培养血屮（无菌操作），平置于桌面上，冷却后即为平板。9•检验灭菌效果将灭菌的培养基放入37°C的温室中培养24〜48h,以检杳灭菌是否彻底。四、思考题1•培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养菌是无菌的？2.加压熬汽火菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？3.管口、瓶口为什么要用棉塞？能否用木塞或棉皮塞代替？

4、为什么？