培养基的配制与灭菌

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1、实验一培养基的配制与灭菌一实验目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。二实验原理人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。营养六要素碳源：提供微生物繁殖所需碳元素的营养物质。用途：糖、蛋白质、核酸合成。氮源：提供微生物繁殖所需氮元素的营养物质。用途：蛋白质、核酸合成。能源：提供微生物生命活动最初能量来源的营养物或辐射能。生长素：微生物生长必需，但又不能自行合成的有机物。无

2、机盐：提供微生物繁殖所需各种重要元素。水分：水是保证生命活动重要的介质。培养基的种类据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。（如葡萄糖铵盐培养基、淀粉硝酸盐培养基等。）2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。（如马铃薯蔗糖培养基。）3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。（如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。）从培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂（常用凝固剂为琼脂）的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2

3、-0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。按照培养基的用途，可将其分为：加富培养基：加富培养基是指在普通培养基里加过血、血清、动物（或植物）组织液或其他营养物质（或生长因子）的一类营养丰富的培养基，用以培养某种或某类营养要求苛刻的异养微生物选择培养基：选择培养基是根据某种或某一类群微生物的特殊营养需要或对某种化合物的敏感性不同而设计出来的一类培养基。利用这种培养基可以将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。鉴别培养基：普通培养基中加入能与某种代谢产物发生反应的指示剂或化学药品，从而产生某种明显的特征性变化，以区别不同的微生物配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物微生物生长繁

4、殖：消耗养分改变培养的酸碱度产生毒素或者抑制物培养基灭菌灭菌方法加热灭菌干热灭菌湿热灭菌过滤除菌辐射灭菌放射线辐照灭菌紫外线灭菌化学药品灭菌加热灭菌——干热灭菌干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160～170℃），时间要长（1～2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。湿热灭菌高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热

5、，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。1g水在100℃时，由气态变为液态时可放出2.26kJ(千焦)的热量。因为空气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以，当水蒸

6、气中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。一般培养基用0.1Mpa，121.5℃,15～30min可达到彻底灭菌的目的。灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。过滤除菌不能用加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），一般可用细菌过滤器进行除菌。紫外线灭菌法紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气

7、中的氧电离成[O]，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成过氧化氢（H2O2）。O3和H2O2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室，接种箱，手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1.2m为宜。为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外灯以前；可在无菌室内(或接种箱内)喷洒3%～5%石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面、凳子可用2%～3%的来苏尔擦洗，然后再开紫