[精品]MS培养基的配制与灭菌 11.doc

《[精品]MS培养基的配制与灭菌 11.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、MS培养基的配制与灭菌一、H的要求1.熟悉组培母液吸取量的计算、琼脂、蔗糖的配制、各种母液的吸取、pH的调节培养基的分装与包装。2.掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。二、仪器与试剂1.器材：高压灭菌锅、移液管、量筒、培养瓶（三角瓶）、烧杯、玻璃棒、标签、pH试纸、电炉、电子天平。2.试剂：配制MS培养基的各种母液、生长调节剂、琼脂、蔗糖、自來水、浓度为0.1mol/L和0.5mol/LNaOH以及浓度为0.1mol/L和0.5mol/L的HC1。三、方法步骤（一）MS固体培养基的配制1.按实验说明进行MS

2、大量元索的称量配置成1000毫升的大量元索母液配置于试剂瓶中。2•按培养基配方计算用量，称好凝固剂和糖的用量，取出母液，按顺序放好,准备好称量用具和溶解用具。试剂名称用量琼脂8g/L蔗糖50g/L大量元素50ml/L维生素和氨基酸5ml/L微量元索5ml/L铁盐5ml/L6-BA0.5ml/LNAA0.2ml/L3.在容器内加入相为配制量1/3的水，加入琼脂溶煮，再根据计算依次加入大量元索、微量元索、铁盐、有机物、生长调节物质等，最后加入蔗糖并搅拌均匀，加水定容，搅拌均匀。4•调整pH值,使PH为5.

3、5〜6.0。5.尽快分装，培养基占容器的1/5-1/4为宜，尽量避免培养基沾到容器内壁或容器口，标记日期。6•封口。(-)MS固体培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌(湿热灭菌法)1•洗涤：把组织培养基用的培养皿、三角瓶、试管等玻璃器皿进行彻底清洗。自然晾干或烘箱干燥。2•包扎：用纱布把培养皿包扎好。1.装水：在高压灭菌锅内装入一定量的水。4•装物品：在灭菌锅内放入含培养基的培养瓶或三角瓶，以及包扎好的玻璃器皿。5.灭菌：于温度为121°C吋,维持20分钟,即可达到灭菌的目的。四、注意事项1.6-BA,AA

4、用量甚微，取用吋要使用移液管，移液管越小越精确。2.注意配制大量元索母液吋防止鈣盐与硫酸盐和磷酸盐产牛沉淀；3.铁盐母液用棕色瓶保存。注意pH的调节；4.灭菌时间和压力、温度的控制；5•分装要干净，灭菌吋锥形瓶尽可能放正，不要使培养基流出。6.若灭菌吋间过长，会使培养基屮的某些成分变性失效。7.开盖后应尽快转移培养瓶，使培养瓶冷却、凝固。一般应将灭菌后的培养瓶储藏于30C以下的室内放置3d,观察灭菌效果。如果无细菌等的产生,即可使用该培养瓶。