ms培养基母液的配制、培养基制备及灭菌.doc

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1、MS培养基母液的配制、培养基制备及灭菌一、实践目的通过木实训，学会恥制大量元索、微量元索、铁盐、维生索、生长调节剂等培养基母液。通过MSI古I体培养基的配制，掌握配制培养基的基木技能。通过对培养基和培养用具的灭菌，掌握高压蒸汽灭菌和干热灭菌的一般操作技术。二、实践用具与材料移液管、电炉、PH试纸、培养瓶、标签、铅笔、量筒、烧杯、容量瓶、广口瓶、玻棒、电了天平、托盘天平、棉花、报纸等用具。硝酸钱、硝酸钾、EDTA、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸毗哆醇、IAA、BA等药品、琼脂、蔗糖、蒸憾水、0.lmol/L的NaOH、0.lmol/L的HCL、95%酒精三、实践学

2、时与场地10学时，植物组培实验室。四、实践内容（一）三角瓶棉塞的制作棉塞的作用有：一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。要求：形状，大小，松紧适度制作：（1）取一大小适当的纱布，将其屮心铺于三角瓶口，任其H然下垂至外壁，用玻璃杯将纱布向瓶内推进，至棉寒所需长度，握住瓶壁及纱布，取适量棉花向内填塞并压紧（2）将棉塞尾部加适量棉花并压紧，使其略大于瓶口，收紧尾部纱布，并用棉线扎进，剪去多余线头和纱布，棉塞制作完毕（3）使用时，再用牛皮纸或二层报纸包扎好（二）培养基母液的配制母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10-100倍的溶液。优点：（1）保证备物质成分的准

3、确性。（2）便于配置时快速移取。（3）便于低温保藏。1、步骤⑴测定各类母液保存容器容量，记录。⑵根据记录设计各种母液所配浓度倍数和制培养基时取用量⑶计算备种药品所需用星⑷称量药品大量元素等大于0.lg用托盘天平称量，微最元素等小于0.lg用电了天平称量。⑸溶解⑹定容⑺写上标签⑻装瓶将配制好的母液分别装入试剂瓶屮，贴好标签，注明备培养基母液的名称、浓缩倍数、期。注意将易分解、氧化的溶液，放入棕色瓶中保存。（9）冰箱保存。2、母液配方MS培养基配方二见教材⑴MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸憾水中。配1升培养基取母液lOOmh化学药品1升量10升量①NH4

4、NO31650mg/L16.5g②KNO31900mgL19-0g③CaCl2・2比0440mg/L4・4g④MgSO.•7H£370mg/L3・7gKH2PO4170mg/L1・7g⑵MS微量元素母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸憎水中。配1升培养基取母液lOmlo化学药品1升量10升量①MnSO4・4H;022・3mg/L223mg(MnSO4・HQ)(21・4mg/L)②ZnSOt・7H:08.6mg/L86mg③CoCj・6Hs00.025mg/L0.25mg④CuSO4・5H:00.025mg/L0.25mg⑤N^MoCU・2Hx00.25mg/

5、L2・5mg⑥KI0.83mg/L8.3mg⑦H3BO36.2mg/L62mg注意：CoC12・6H2O和CuSO4・5H2O可按1（）倍量，即0.25mgX10=2.5mg（100倍量25mg）称取后,定容于100ml水中,每次取1ml（0.1ml,即含0.25mg的量）加入到母液中。⑶MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸镭水屮。配1升培养基取母液lOmL化学药品1升量10升量Na2・EDTA37.3mg/L373mgFeSCh・71L027.8mg/L278mg注意配制时，应将两种成分分别溶解在少最蒸催水屮，其屮EDTA盐较难完全溶解,可适当加热

6、，并将pH调至5.5。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一•种成分逐加逐剧烈恭荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶屮。⑷MS有机物母液（100X）称10升量溶解在100ml蒸憾水中。配1升培养基取母液lOmlo化学药品1升量10升量①烟酸0.5mg/L5mg②盐酸毗哆素（VB6）0.5mg/L5mg③盐酸硫胺素（VB1）肌醇100mg.Llg⑤甘氨酸2mg/L20mg⑸生长调节剂单独配制，浓度为1-5mg/ml（书屮为0.5-lmg/ml）,一般配成4mg/ml。溶解生长索时，可用少量0・5-1N的NaOH（6-BA）或1ML95%酒精（2,4

7、・D和NAA）溶解，溶解分裂素类用0.5-1N的HC1加热溶解。3•配制培养基母液时注辽事项：%%某些离子易发生沉淀，可先用少量蒸憎水溶解，在按配方顺序依次混合;%%配制母液时必须用蒸馄水或重蒸馄水；%%药品应用化学纯或分析纯；（三）培养基的制备1.步骤⑴木次实验要求制作培养基数量1L培养基成分用量10X大最元素母液100ml100X微量元素母液10ml1000XCoCl2•6H2O母液1ml1000XCuS04•5H20母液1ml100X铁盐母液10ml100X有机物母液10ml蔗糖30g琼脂10g⑵根据制作要求计算培养基各种母液的用量。3、按下列母液的顺序，