实验三 MS培养基母液的配制与保存.doc

《实验三 MS培养基母液的配制与保存.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、实验三MS培养基母液的配制与保存一、目的与要求1、通过us培养基贮备液的配制，掌握培养基贮备液和各种激素母液的溶解与配制方法;2、通过精确衡量，培养学生周密的思维和严谨的科学态度。二、实验原理母液是将所用培养基的化学成分按一•定比例配制成的浓缩液。配制母液的目的是方便培养基配制时的快速移取及低温保藏；减少误差，保证各物质成分的准确性;节幼人力物力，提高工作效率。贮备液一般比所需浓度高10-100倍进行配制。三、材料、仪器与试剂1、实验用具：电子天平（精确度0.001和0.0001各1台）、磁力搅拌器、烧杯（500ml、1000ml）、容量瓶（500ml、1000ml）、试剂瓶（100

2、0ml、500ml、100ml）、移液管（1mL、5油八10mb）、标签纸、钢笔等。玻璃漏斗、玻璃棒、记号笔、pH计、石棉网、小药勺等。2、试剂：95%酒精,0.lmol/LNaOH,0.lrnol/LHC1,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物，植物生长调节剂及蒸傭水等。（-）母液的配制1、MS大量元素母液（10X）称10升量溶解在1升蒸绸水中。配1升培养基取lOOmlo化学药品1升量10升量NH4NO31650mg/L16.5gkno31900mg/L19.0gCaCl2・2H20440mg/L4.4gMgSO4・7H20370mg/L3.7gKH2PO4170mg/L1.7g

3、注意：大量元素母液配制吋要注意一些离子之问易发生反应而沉淀,如Ca2+和SO广，Ca2M芒和P0广一-起溶解后会产生沉淀，所以应将称量好的各种成分分别放入烧杯中，加少量蒸谓水使之溶解后，依次混合，混合时要将彼此能够发生化学反应的化合物间隔倒入容量瓶中，再以蒸徭水定容。为避免沉淀发生，大量元素母液浓度不能太高，若用量大，只能将大量元素每种化合物单独配成母液使用，如把NH4XO3单独配制成100倍母液。2、MS微量元素母液（100X）植物组织及细胞培养实验指导称10升量溶解在100ml蒸他水中。配1升培养基母液lOmlo化学药品1升量10升量MnSO4・4H2022.3mg/L223m

4、gZnSO4・7II208.6mg/L86mgCoC12・6H200.025rng/L0.25mgC11SO4・5H200.025mg/L0.25mgNci2MoO.

5、•2II2O0.25mg/L2・5mgKI0.83mg/L8.3ingH3BO36.2mg/L62mg注意：CoCl2・6H2O和CuSO.j・5&0可按10倍量(0.25mgX10=2.5mg)或100倍量（25mg）称収后，定容于100ml水中，每次収10讥或lml,即含0.25mg的量。3、MS铁盐母液（100X）称10升量溶解在100讥蒸绸水中。配1升培养基母液10ml。化学药品1升量10升量Na2・EDTA3

6、7.3mg/L373mgFeSO’i・7H2027.8mg/L278mg注意：两种成分分别准确称量后分别溶解在少量蒸懈水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。混合时，一般将N&2・EDTA溶液缓慢倒入FeSO’i・7H.0,充分震荡或加热5-10min,使其充分螯合，至产生深黄色溶液，再把PH值调到5.5,最后定容，保存在棕色试剂瓶中。4、MS有机物母液（100X）称10升杲溶解在100ml蒸绸水中，配1升培养基母液10ml。化学药品1升量10升量烟酸0.5mg/L盐酸毗哆素（VB6）0.5mg/L5mg盐酸硫胺索（VB1）0.1nig/Lling肌醇100mg/L1g甘氨酸2

7、mg/L20mg（二）生长调节剂的配制生长调节剂要求单独配制,浓度一般配制为0.1-1.0mg/ml1、精确称量：分别称収生长索类（IBA、NAA、2,4-D）、细胞分裂素类（6-BA、KT、ZT）和赤霉素（GA）各0.1-l.Omg；2、溶解:（1）将生长素时类激索用少量0.lmol/L的NaOH或95%酒精溶解；（2）将细胞分裂素类激素用少量0.lmol/L的HC1加热溶解；（3）将赤霉素95%酒精溶解；3、定溶：用蒸饰水或去离子水分别将以上生长调节剂定容至100ml,摇匀即成0.1-1.0mg/ml的激素母液。（三）母液的保存1、装瓶：将配制好的母液分别装入试剂瓶中，贴好标签，

8、注明各培养基母液的名称、浓缩倍数或配制1L培养基的用量及配制日期。（注意将易分解、氧化者，放入棕色瓶中）2、贮藏：4°C冰箱。注意事项1、配制母液所需药品应采用分析纯或化学纯试剂。2、配制母液用水为蒸谓水或去离子水，试剂可以通过加热或置于磁力搅拌器上加速溶解。3、一些离子易发生沉淀，可先少量水溶解，在按配方顺序依次混合，防止母液发生沉淀。4、母液保存时间不要过长，大量元素母液最好1个月内用完。如发现母液有混浊或沉淀现象发生，则弃之勿用。五、实验报告及思考题