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时间:2020-03-03
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1、实验三MS培养基母液的配制与保存一、目的与要求1、通过us培养基贮备液的配制,掌握培养基贮备液和各种激素母液的溶解与配制方法;2、通过精确衡量,培养学生周密的思维和严谨的科学态度。二、实验原理母液是将所用培养基的化学成分按一•定比例配制成的浓缩液。配制母液的目的是方便培养基配制时的快速移取及低温保藏;减少误差,保证各物质成分的准确性;节幼人力物力,提高工作效率。贮备液一般比所需浓度高10-100倍进行配制。三、材料、仪器与试剂1、实验用具:电子天平(精确度0.001和0.0001各1台)、磁力搅拌器、烧杯(500ml、1000ml)、容量瓶(500ml、1000ml)、试剂瓶(100
2、0ml、500ml、100ml)、移液管(1mL、5油八10mb)、标签纸、钢笔等。玻璃漏斗、玻璃棒、记号笔、pH计、石棉网、小药勺等。2、试剂:95%酒精,0.lmol/LNaOH,0.lrnol/LHC1,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,植物生长调节剂及蒸傭水等。(-)母液的配制1、MS大量元素母液(10X)称10升量溶解在1升蒸绸水中。配1升培养基取lOOmlo化学药品1升量10升量NH4NO31650mg/L16.5gkno31900mg/L19.0gCaCl2・2H20440mg/L4.4gMgSO4・7H20370mg/L3.7gKH2PO4170mg/L1.7g
3、注意:大量元素母液配制吋要注意一些离子之问易发生反应而沉淀,如Ca2+和SO广,Ca2M芒和P0广一-起溶解后会产生沉淀,所以应将称量好的各种成分分别放入烧杯中,加少量蒸谓水使之溶解后,依次混合,混合时要将彼此能够发生化学反应的化合物间隔倒入容量瓶中,再以蒸徭水定容。为避免沉淀发生,大量元素母液浓度不能太高,若用量大,只能将大量元素每种化合物单独配成母液使用,如把NH4XO3单独配制成100倍母液。2、MS微量元素母液(100X)植物组织及细胞培养实验指导称10升量溶解在100ml蒸他水中。配1升培养基母液lOmlo化学药品1升量10升量MnSO4・4H2022.3mg/L223m
4、gZnSO4・7II208.6mg/L86mgCoC12・6H200.025rng/L0.25mgC11SO4・5H200.025mg/L0.25mgNci2MoO.
5、•2II2O0.25mg/L2・5mgKI0.83mg/L8.3ingH3BO36.2mg/L62mg注意:CoCl2・6H2O和CuSO.j・5&0可按10倍量(0.25mgX10=2.5mg)或100倍量(25mg)称収后,定容于100ml水中,每次収10讥或lml,即含0.25mg的量。3、MS铁盐母液(100X)称10升量溶解在100讥蒸绸水中。配1升培养基母液10ml。化学药品1升量10升量Na2・EDTA3
6、7.3mg/L373mgFeSO’i・7H2027.8mg/L278mg注意:两种成分分别准确称量后分别溶解在少量蒸懈水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。混合时,一般将N&2・EDTA溶液缓慢倒入FeSO’i・7H.0,充分震荡或加热5-10min,使其充分螯合,至产生深黄色溶液,再把PH值调到5.5,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。4、MS有机物母液(100X)称10升杲溶解在100ml蒸绸水中,配1升培养基母液10ml。化学药品1升量10升量烟酸0.5mg/L盐酸毗哆素(VB6)0.5mg/L5mg盐酸硫胺索(VB1)0.1nig/Lling肌醇100mg/L1g甘氨酸2
7、mg/L20mg(二)生长调节剂的配制生长调节剂要求单独配制,浓度一般配制为0.1-1.0mg/ml1、精确称量:分别称収生长索类(IBA、NAA、2,4-D)、细胞分裂素类(6-BA、KT、ZT)和赤霉素(GA)各0.1-l.Omg;2、溶解:(1)将生长素时类激索用少量0.lmol/L的NaOH或95%酒精溶解;(2)将细胞分裂素类激素用少量0.lmol/L的HC1加热溶解;(3)将赤霉素95%酒精溶解;3、定溶:用蒸饰水或去离子水分别将以上生长调节剂定容至100ml,摇匀即成0.1-1.0mg/ml的激素母液。(三)母液的保存1、装瓶:将配制好的母液分别装入试剂瓶中,贴好标签,
8、注明各培养基母液的名称、浓缩倍数或配制1L培养基的用量及配制日期。(注意将易分解、氧化者,放入棕色瓶中)2、贮藏:4°C冰箱。注意事项1、配制母液所需药品应采用分析纯或化学纯试剂。2、配制母液用水为蒸谓水或去离子水,试剂可以通过加热或置于磁力搅拌器上加速溶解。3、一些离子易发生沉淀,可先少量水溶解,在按配方顺序依次混合,防止母液发生沉淀。4、母液保存时间不要过长,大量元素母液最好1个月内用完。如发现母液有混浊或沉淀现象发生,则弃之勿用。五、实验报告及思考题
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