数据定量分析.doc

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1、■AgilentTechnologiesInnovatingtheHPWay实验室练习6：数据定量分析在这个实验屮，您将建立具有三个浓度级别的校止数据库,并将其保存为方法的一部分。该方法用于未知物的定量计算。在这个实验屮：•获取所需信息以设置校正方法•建立一个5个浓度级别的含内标的校正数据库•定量一个未知化合物对以下化合物进行定量：内标目标化合物TributylphosphateAcetamide,N-phenylphenacetincaffein积分精确定量的重要因素之一是正确积分。1)通过选择File/LoadDataFil

2、e…调用C:MSDCHEM1DATAVOADATACLWV020.D文件，选择Method/LoadMethod...调用DEFAULT.M方法。2)选择Chromatogram/SelectIntegrator及RTEIntegrator单击OKoOK对积分来说只是临时选择。现在让我们对caffein设定积分参数。3)选择Chromatogram/ExtractIonChromatograms...完成图1所示的需要输入的项冃(注意时间范围)单击OK。图14)现在编辑RTE的缺省积分参数。选择Chromatogram

3、/MSSignalIntegrationParameters...完成图2所示的要输入的项H。须知半欲在最小峰面积(minimumpeakarea)屮添入人于100的数之前必须选屮AreaCounts选项框。图25)单击OK接受所做的改变。现在通过选择Chromatogram/Integrate用这些参数做积分。注意离子194被积分，而离子67没有被积分。让我们降低最小面积来解决这一问题。6)选择Chromatogram/MSSignalIntegrationParameters...完成图3小所示的各项内容。图37)单击Sav

4、e...和OK输入积分文件名字VOLATILE』，单击OK。图48)在积分参数框屮单击OK返回离子质量色谱。在Chromatogram/Integrate用降低后的最小峰面积参数做积分。注意此吋离子67和194都被积分了。现在我们建立并保存了积分参数，它将被用于定量数据库。9)选择Chromatogram/DrawChromatogram查看当前数据文件的TIC图。建立校正曲线:无论SCAN和SIM方式，用提取离子质量色谱做校正和定量比用总离子流色谱峰要好，因为能提高信噪比。用提取离子定量比用TIC精度更高。TIC则用于开始设置

5、校正参数吋确定保留吋间。1)选择Calibrate/SetUpQuantitation...o2)QuantitationDatabaseGlobals对话框会显示出来。完成图5屮所需填入的内容。QuantitationDatabaseGlobalsQuantReportingInfoCalibrationT,iUe

6、VolatileOrganicsDefaultMultiplier1.00000DefaultSampleConcentration0.00000ReferenceWindow

7、0.500Minutes*N.on-

8、ReferenceWindow

9、0.500~Minutes▽LocatingPeaksMinutes0.05CorrelationWindow(signal4o-signalretentiontimematch)F7UseRTONTNewCompoundInfoIntegrationParameterD.efault+/-[0.500Cu理eFitLinearRegressionIF

10、fe

11、volatile,p)minarTRliidexp^fllNOTICEJMeasureArea二Unitsofconcentrationug

12、/L1STD

13、50.000DatapointWeightforlinearregressionsEqualweightingCancel注意标有NOTICE处用了RTE积分参数文件。3)完成后单击OK。EditCompounds框(图6)会显示出来:xbeforeCompoundNamedenotesISTD区就ExitI旦elp4)单击InsertAbove,图7会显示出来：图7注意:必须首先输入内标。所有在内标之后输入的化合物都用它定量，直到遇到下一个内标。5）将7・13分钟范围内的色谱图放大在窗口屮。对准窗口2屮10.7分

14、钟处双击鼠标右键。在屏幕上会出现什么信息？注意保留时间（箭头在X轴的位置）被填写在QuantSetup窗口。同时所指定保留时1可的质谱显小■在窗口1O6）输入化合物名称。填入化合物名称。第二个化合物是Tributylphosphate大约在10.7分钟。注意如果