棘孢木霉几丁质酶基因tachi1在毕赤酵母中的高效表达.pdf

《棘孢木霉几丁质酶基因tachi1在毕赤酵母中的高效表达.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、万方数据HighLevelExpressionofChitinaseGene(tachil)fromTrichodermaasperelluminPichiapastorisThesissubmittedtoQjngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofScienceTangWei(CollegeofLifeScience)SupervisorAssociateProLXianH,LgquaneSOF"Associaro!Xian

2、HongonanQingdao·China万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：枷砷时间：加fy年彳月谚日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，

3、可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：导师签名：柄脚威佬庭时间：2．ofz年占月治时间：加，>年6月湔万方数据青岛农业大学摘要棘孢木霉几丁质酶基因tachil在毕赤酵母中的高效表达摘要几丁质酶作为木霉菌防治植物病虫害的主要因子，在生物防治和环境保护等领域发挥着重要的作用。为了研究棘孢木霉(Trichodermaasperellum)几丁质酶及其酶学性质，明确生防机制，将棘孢木霉几丁质酶基因tachil

4、(不舍信号肽)克隆到分泌性表达载体pPIC9K上，构建重组表达质粒pPIC9K／tachil，电击转化毕赤酵母GSll5，筛选获得了高效分泌表达几丁质酶Taehil的酵母工程菌GS．tachil．K，对其进行甲醇诱导培养，通过单因素和正交试验对Tachil的表达条件进行优化，纯化目的蛋白并进行酶擎}生质的研究。结果表明，GS．tachil—K的最佳表达条件o．pH为6．5，甲醇诱导浓度为O．5％，起始细胞浓度为0／)600=2，甲醇诱导时间为180h；几丁质酶TachiI活力可达17．93U／mL，蛋白表达量为6．19g／L；表达的几丁质酶表

5、观分子量约为44kDa，酶反应最适的温度和pH分别为50℃和5．5，具有较宽的温度、pH适用范围；50℃以下保持较高的酶活力，在碱性条件下稳定性较差；米氏常数玉，m和最大反应速度p，舭。分别为6．537g／L和47．37x103lunol／L·min；TachiI受Ag+、H矿+、cu2+、Fe2+和高浓度的SDS及p．巯基乙醇强烈抑制．几丁质酶基因tachil生物信息学分析显示，该基因鳊码424个氨基酸；Taehil属于糖基水解酶18家族内切几丁质酶，包含SIGGW底物结合位点和FDGIDVDWE活性中心位点，信号肽长度为22个氨基酸；含有

6、1个潜在的N．糖基化位点；二级结构以(it．螺旋、D．折叠和无规则卷曲为结构元件，三级结构为(彬p)8的圆桶形结构．重组几丁质酶可抑制多种病原真菌茵丝生长、孢子萌发和芽管伸长，其中对板栗疫病病菌、杨树腐烂病病菌和苹果腐烂病病菌的菌丝生长抑制作用较强。关键词：棘孢木霉；凡丁质酶；毕赤酵母；基因表达万方数据青岛农业大学AbstmctHighLevelExpressionofChitinaseGene(tachil)fromTrichodermaasperelluminPichiapnstorls●lAbstractChitinases，[Iret

7、houghttobeamajorfactorforresistingplantpestsanddiseasesbyTrichoderma，andplayanimportantroleinbiologicalcontrolandenvironmentalprotection．Inordertostudybio-controlmechanismandobtainehitinaseproductions，andclearthecharacterizationofchitianasefromZasperellum，inthisstudy,arecom

8、binantplasmidpPIC9Khaehilwasconstructedbyinsertinggenetachi!(withoutsignalpeptide)