高山被孢霉Δ^6-脂肪酸脱氢酶基因在红冬孢酵母中的表达.pdf

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1、第18卷第4期生命科学研究Vo1．18No．42014年8月LifeScienceResearchAug．2014高山被孢霉△6一脂肪酸脱氢酶基因在红冬孢酵母中的表达李凌彦，胡彬彬，赵吉然，魏云林，林连兵，季秀玲，张琦(昆明理工大学生命科学与技术学院，中国云南昆明650500)摘要：以绿色荧光蛋白fgreenfluorescentprotein，GFP)作为报告基因，将质粒pRH2304转化红冬孢酵母YM25235进行表达分析．荧光显微观察结果表明GFP在YM25235获得表达．建立了红冬孢酵母YM252

2、35遗传转化方法。在此基础上。以高山被孢霉△一脂肪酸脱氢酶基因取代pRH2304中的G基因，构建重组质粒pRH2304MAD6，将其转化红冬孢酵母YM25235进行表达分析。PCR结果表明，高山被孢霉△一脂肪酸脱氢酶基因已经整合到YM25235基因组中，进一步的脂肪酸气相色谱分析结果表明，该基因编码产物催化n一6途径中的亚油酸转化成一亚麻酸，占细胞总脂肪酸的4．35％，但没有检测到催化n一3途径中的一亚麻酸转化成十八碳四烯酸。关键词：红冬孢酵母；高山被孢霉；A6脂肪酸脱氢酶基因；一亚麻酸；表达中图分类号：

3、Q786文献标识码：A文章编号：1007—7847(2014)04—0304一O6ExpressionofMortierellaalpineA6-DesaturaseGeneinRhodosporidiumKratochvilovaeLILing-yan，HUBin-bin，ZHAOJi-ran，WEIYun—lin，LINLian—bing，JIXiu—ling，ZHANGQi(CollegeofLifeScienceandTechnology,KunmingUniversityofScienceand

4、Technology,Kunming650500，Yunnan，China)Abstract：Usinggreenfluorescentprotein(GFP)asareportergene，theplasmidpRH2304waselectroporat—edintoRhodosporidiumKratochvilovaestrainYM25235f0rexpressionanalysis．Fluorescentmicroscopyre—vealedthattheGFPgenewassuccessful

5、lyexpressedinthetransgenicyeastcells。whichindicatedthatthetransformationmethodofpRH2304intoYM25235wasestablished．Basedonthis，theGFPgeneontheplasmidwasreplacedbyMortierella却ineA-desaturasegenetoconstructanewrecombinantplasmidpRH2304MAD6。whichwasfurthertran

6、sformedintoYM25235forexpression．PCRresultshowedthatthetargetgenehasbeenintegratedintothegenomeofYM25235．SubsequentGCanalysisoffattyacidsfromtransgenicyeastsindicatedthatthecodingproductofMortierellaalpineA-desaturasegenecatalyzedtheconversionof一6fattyacid

7、linoleicacidinto—linolenicacid．ThepercentageofT-linolenicacidtototalfattyacidswas4．35％．However．noconversionofn一3fattyacid—linolenicacidintosteridonicacidcat-alyzedbythesameA-desaturasewasdetected．Keywords：RhodosporidiumKratochvilovae；Mortierellaalpine；A-d

8、esaturasegene；—linolenicacid；ex—pression(／feScienceResearch，2014，18(4)：304～309)收稿日期：2014—02—09；修回日期：2014—05—22基金项目：国家自然科学基金资助项目(31160016；31260034)；云南省应用基础研究基金资助项目(KKSA201126005)；教育部回国人员科研启动基金资助项目(KKQA201226003)作者简介：