粪便DNA抽提方法的比较研究.pdf

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1、万方数据生堡拴坠医堂塞盍!Q盟生!旦筮2Q鲞筮!翅g!垫』!坐丛鲤：地!!瑾!Q盟，!生!Q，盟垒!粪便DNA抽提方法的比较研究吴仲文韩樱鲁海峰李兰娟盛吉芳左健·67·．基础实验诊断研究．【摘要】目的比较国际主要微生态实验室4种常用的核酸抽提方法获得的粪便DNA的质量。方法采用针对目的细菌(总细菌、类杆菌一普氏杆菌属组、双歧杆菌、肠杆菌科细菌及肠球菌)168rDNA的特异性引物及实时定量PCR方法，分析QIA蛐po粪便DNA试剂盒法(QIA法)、F鹊tDNAo硒t试剂盒法(Fast法)、酚-氯仿．玻璃珠击打法(酚·氯

2、仿一玻珠法)及QIA锄poDNA粪便试剂盒+玻璃珠击打法(QIA+玻珠法)4种方法抽提获得的10份人粪便DNA的质与量。结果通用引物特异性扩增粪便总DNA，发现4／10份由酚-氯仿一玻珠法获得的粪便DNA中存在PCR抑制剂，过柱纯化后PCR抑制现象消失。实时定量PcR检测粪便总细菌量，以QIA法与QIA+玻珠法获得的量最高(分别为12．16±o．18，12．05±o．48)，而F鹊t法与酚一氯仿一玻珠法获得的粪便细菌量(分别为11．26±O．40，11．21±0．16)与QIA法相比显著低下(均P<0．05)。采用Q

3、IA法(11．63±O．23，8．68±0．51)及QIA+玻珠法(11．67±O．56，8．77±O．56)抽提获得的粪便类杆菌-普氏杆菌及肠杆菌科细菌的DNA量显著高于F髂t法(10．67±0．47，7．39士0．51)及酚一氯仿-玻珠法(10．65±O．33，7．40±0．18)(均P

4、同的目的细菌群对象可以选择不同的方法。【关键词】粪便；DNA；聚合酶链反应A咖pa—s蚰of蠡眦rmemo凼for既h翟c娃onofh硼眦鼬咖DNAby璐i雌real恤鼬PCR聊Z砌，

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