核酸共沉剂辅助提取法抽提大豆油DNA的研究-论文.pdf

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1、◎doi：10．3969~．issn．1000-8071．2013．010．016核酸共沉剂辅助提取法抽提大豆油的研究邹继浩李洁石瑞岳静(沈阳化工大学制药与生物X-．程学院110142)摘要：大豆油DNA的提取一直是大豆油转基因氯甲烷、异戊醇、Tris一饱和酚、乙醇、异丙醇、氯化成分检测的关键环节。本研究摸索了核酸共沉剂辅助提钠、Na2EDTA。取法抽提大豆油中DNA的方法，取得了突破性的进展，1．3试剂的配制可为相关研究提供参考。CTAB提取液(经典配方)：1000mL水中溶解关键词：大豆油DNA核酸共沉剂十六烷基三甲胺20g，Tris12．114g，NaC181．816g，Na

2、2EDTA7．444g，聚乙烯吡咯烷酮2Og。大豆油是以大豆为原料，经过压榨、高温、脱酸、20％SDS溶液(1OOmL)：100mL水中溶解20gSDS。脱臭等工艺加工出来的。在加工过程中，经过高温、高乙酸钠溶液(3mol／L)：800mL水中溶解408．1g水压等处理，其中的DNA已降解为大小不一的碎片，且含乙酸钠，用冰乙酸调至pH5．2，加水定容至1L，高压灭量极低，这就给大豆油中DNA的提取造成了很大困难。菌。因而DNA提取技术成为食用油PCR检测技术的瓶颈，PBS缓冲溶液(1L1：1000mL水中溶解NaC18．07g、是食用油转基因成分检测成功与否的关键所在。本研究KC1

3、0．20g、Na2HPO43．5814g、0．25gKH2PO4。旨在探寻一种高效、快捷的DNA提取方法，用于提取大TE缓冲液：Tris0．01mol／L，Na2EDTA1．0mmol／L(用豆油中的微量DNA，以供检验是否为转基因产品或用于盐酸调至pH8．0，高压灭菌)。转基因成分的检测。2实验方法1材料与试剂用核酸共沉剂辅助提取法提取大豆油中的DNA，其1．1材料具体操作如下。金龙鱼转基因大豆油、金龙鱼非转基因大豆油，购2．1乳化于沈阳市家乐福超市云峰店。在2mL离心管中加入lmL大豆油及400LTE(Tris—1．2试验药品EDTA)，颠倒混匀后，适当地漩涡震荡几秒，使其充分

4、Dr．GenTLEPreciptitationCarrier(核酸共沉剂试剂盒，混匀后以13O00fmin转速室温离1~,5min去上层油脂。大连宝生物)；溴代十六烷基三甲胺、十二烷基硫酸钠、2．2溶解DNATris、聚乙烯吡咯烷酮、乙酸钠、正己烷、石油醚、三在离心管中剩余约400L水相溶液中加入1／10体积的3mol／LCH3COONa(pH5．2)溶液，均匀混合。加入4L基金项目：大学生科技创新校内资助项目(2012—05)值，温度对成苗率有不同的影响。在A低温度下“北农先个处理。在实际生产中随着精量播种的面积不断推广其用锋”和种衣剂处理发芽率最高，两者结合(处理)用在低温种量

5、的不断减少对种子发芽率要求也相对提高，如何保证下比单独用包衣剂包衣(处理31分别高出的11％、10％发芽或不减少室内检验芽率在田间出苗率呢?以检验室角度出率、比对照分别高24％、17％，效果明显；B条件下各品发影响出苗的有三个因素，温度、光照、水分，而东北春种各处理是单独用“北农先锋”芽率高(处理1)，比包衣种播玉米播种后会时常遇到低温，如果应用外在因素(类处子(处理3)分别高出6％、2％、比对照分别高5％、3％。但理2)抵抗不利条件，促进或保证田间出苗率，提高种子附B条件温度是按检验规程规定温度，最适宜的条件下发芽加值、规避风险，能提高品种的市场竞争力为企业创造利没有考虑病害对其

6、影响，采用这个温度是想说明在检验室润。不考虑成本情况下应用液体肥料在包衣前进行拌种，条件下“北农先锋”和包衣剂(处理2)效果不明显，而A低简单易行，同时在土壤偏酸、偏碱或盐度过高，不利于植温也就是接近田间不利条件下处理2方法对发芽率有明显株吸收营养时也有效。作用，从根系主根长度、粗度及侧根数处理2好于其他几(收稿日期：2013—07—12)@种子世界2o13．10骓c1ennnca：xpenment◎臣，的Dr．GenTLEPreciptitationCarrier，均匀混合。测，其结果见表3。2．3沉淀DNA表3核酸共沉剂法油样紫外分光光度检测结果加入2．5倍体积的无水乙醇，充分

7、混匀。12000r／min，4℃离心15min。弃上清液，留白色沉淀。2．4抽提并获取DNA加入70％乙醇，12000r／rain，4~C离心15rain，弃上清3．2琼脂糖凝胶电泳检测结果并干燥沉淀。加人TE缓冲液溶解DNA，4℃保存备用。对采用核酸共沉剂辅助提取法抽提、沉淀下来的大2-5紫外分光光度检测豆~tDNA，经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳检测，结果见取DNA样品作适当稀释，配制成5～50g／mL的溶图1。液，用photoLab6100型紫外分光光度计测定26