石蜡切片组织DNA抽提

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1、石蜡组织切片DNA抽提鹿亚超/PeterLu阿斯利康中国创新研究中心(ICC)2010.04.11ANNUALBUSINESSREVIEW概览EGFR突变检测申请病理学评估样品处理DNA抽提DNA定量（质控）EGFR突变检测DNA测序ARMS-2-内容1.EGFR突变检测申请2.样品处理EGFR突变检测申请3.DNA抽提病理学评估样品处理DNA抽提DNA定量（质控）EGFR突变检测DNA测序ARMS-3-1.EGFR突变检测申请-4-样品处理组织蜡块切片病理学评估DNA实验/数据存放位置,使用情况,是否返还样品移交记录（实验室间）LIMS(实验室信息管理系统

2、)MicrosoftExcelorAccess手写记录-5-DNA抽提前福尔马林固定石蜡包病理学评估埋组织(FF-PET)确认肿瘤细胞数大于50-6-3.DNA抽提福尔马林固定石蜡包埋组织受破坏DNA（固定步骤）降低DNA得率后续分析困难需要可靠的DNA抽提方法-7-DNA抽提方法•商业试剂盒vs.实验室固有方法试剂盒实验室固有方法质控情况经过质控可能有内部质控方便性方便不方便成本高低DNA质量取决于方法•一般，DNA质量越高的方法，DNA得率越低。•需要样品量：4~5cm25µm-8-QiagenQIAampDNAMiniKit订购方便已质控试剂盒

3、DNA得率相对较高-9-QIAampMiniKitProcedure-10-石蜡组织切片DNA提取：实验原理加热法&QIAgenDNA试剂盒：通过高温结合吐温20以及蛋白酶K使DNA从石蜡组织中裂解释放，并通过DNA吸附柱有效提取DNA关键点：吐温20：非离子型变构剂,裂解细胞核释放DNA蛋白酶K：消化与DNA结合的组蛋白DNA吸附柱：有效快速收集DNA，有效减少PCR反应抑制剂对后续实验的影响-11-石蜡组织切片DNA提取步骤1.石蜡组织切片收集每个样本以约4~5cm25µm的石蜡组织切片量为宜，每张片子应由病理医生进行及鉴定病理鉴定，并圈出肿瘤区域使

4、用一次性解剖刀从组织片中刮取石蜡2.组织切片刮取组织至离心管中，尽量防止组织碎片飞散造成交叉污染通过吐温20释放使DNA从细胞核中释放，3.加热裂解消化DNA蛋白酶K消化组蛋白,消化裂解过夜，期间至少重复加入4µL10mg/mL蛋白酶K两次，每次间隔1小时以上通过离心石蜡将悬浮于裂解液上层，吸取4.去除石蜡石蜡层下的溶液，注意吸取时应尽量小心以避免吸入石蜡等污染物5.吸附柱收集DNA使用QIAgen吸附柱收集-12-该方法优点无需二甲苯脱蜡，避免对实验人员的伤害采用加热与吐温蛋白酶K结合，充分裂解胞核消化DNA采用QIAgen吸附柱有效快速收集DNA，减少P

5、CR抑制剂影响-13-控制交叉污染必须严格控制样品间交叉污染一个样品用一个解剖刀片实验前后清洁工作区经常换手套无PCR产物区域-14-核心信息可靠的样品追踪记录DNA质量不高（FFPET样品）可靠的DNA抽提方法方便后续EGFR突变分析控制样品间交叉污染-15-实验部分：安全注意事项实验室内必须戴专用安全眼镜实验室内必须穿实验服办公区内不准穿实验服实验室内动手做实验前必须戴手套-16-实验部分：分组组姓名组姓名邢士超岳麓刘毅张稷王高文#1#4陈建李建民王玉艳韩晓红谭小军王帅张晔#2#5吴传勇李喆蔡旭李喆冯芬#3时利-17-