绵羊卵巢组织石蜡切片

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1、绵羊卵巢组织石蜡切片制作条件优化研究姜晓龙陈建伟姚晓磊赵妙妙吕丽华(山西农业大学动物科技学院山西太谷030801)【摘要]为观察绵羊正常卵巢组织的形态结构，采用苏术精一伊红(hcmatoxylirrcosin,HE)染色法制作绵羊卵巢组织石蜡切片。结果显示，在切片制作过程中存在的问题主要包括染色不均、染色对比不明显、过度染色、染色过浅和切片出现斑点等。在试验过程中可通过充分分化、蓝化、充分水洗等因素的控制来提高切片的染色效果，该方法可为动物卵巢及卵泡染色切片制作提供技术指导。关键词:绵羊;HF染色;卵巢;切片;优化HF染色法是石蜡切片技术中常

2、用的染色法。苏术精碱性染液可使细胞核内染色质与胞质内核糖体着蓝紫色;伊红酸性染料可使细胞质和细胞外基质中的成分着红色，作为组织学、月王胎学、病理学教学与科研中最基木的技术方法而被]’一泛使用川。木试验通过HF染色技术制作石蜡切片，该方法是一种多步骤、多因素决定的过程，在试验中由于操作不当，经验不足，以及实践的使用和时间的掌握等诸多因素影响，出现切片脱落、染色不均匀、糊不清、褶皱，及细胞核和细胞质对比不明显等现象，从而影响使用效果。HF染色切片制作过程中出现的问题进行了探究，并提出解决方案，这对相关的试验操作具有指导意义。1材料与方法1.1试验

3、材料木试验选用山西省清徐县屠宰场成年健康母羊，屠宰后取卵巢。1.2主要试剂和仪器Youin氏固定液、包埋纸盒、染色缸、融蜡箱、切片机、恒温箱、载玻片、小烧杯、吸水纸、移液枪、盖玻片、石蜡，1%盐酸水溶液、0.500伊红(水溶性)溶液、各梯度的乙醇、二甲苯、苏术精染液、伊红染液、中性树胶、蒸馏水。1.3试验方法1.3.1绵羊卵巢的处理:将卵巢投入预先配好的固定液中(1000福尔马林，Youin氏固定液等)，使组织蛋白质变性并防II几细胞死亡后自溶或细菌分解。1.3.2脱水透明:用低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织中的水分，再将组织块置于二

4、甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块中的酒精，才能浸蜡包埋。1.3.3浸蜡包埋:将透明处理的组织块置于熔化的石蜡中，放入熔蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋。1.3.通切片与贴片:将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成厚度为}^-8pm薄片。切卜的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放朽。C恒温箱中烘干川。1.3.脱蜡染色:染色前，用二甲苯门)脱蜡5min，入二甲苯Ul}中脱蜡10min，用吸水纸吸干液体;入100%乙醇U)smin，入100%乙醇门1)5min，用吸水纸吸干液体;入9500乙醇3min并过流水2min，用吸水纸

5、吸干水分。苏术精染色}^-8min，并用1%盐酸水溶液分化5}-10s，自来水洗返蓝15^-30min;0.500伊红(水溶性)染色30s,95%乙醇门脱水5min，用吸水纸吸干液体;95%乙醇门1)脱水5mln，用吸水纸吸干液体;入100%乙醇门}6min,100%乙醇}ll}2min,用吸水纸吸干液体入二甲苯<1)中透明2^-3min，二甲苯Cll)中透明5min。用移液枪吸取适量中性树胶于载玻片上，盖上盖玻片待凝固后观察结果。2结果与分析2.1正常染色经显微镜观察，正常HF染色切片见图1-A,l-B。图1-A可见卵巢上有腔卵泡的存在，图

6、1-B可见卵巢卵泡颗粒细胞(GCS、内膜细胞CTC)的细胞核呈蓝紫色;而周围的细胞质、纤维被染成粉红色，切片染色均匀无褶皱，细胞核和细胞质对比明显。2.2染色异常在切片制作尤其是染色过程中常会出现染色异常情况，从而影响了正常的组织形态观察。图1-C显示细胞核染色苍白、暗淡，细胞核与细胞质染色对比度差。出现这类问题有三种原因:切片在苏术精染液停留时间太短;苏术精染液过度氧化，失去染色能力;分化步骤处理时间过长。可进行切片重新染色。如果组织在酸性固定液Zcnkcr,Bouin及非中性缓冲甲醛液固定时间过长，细胞核染色能力将减弱，须增加其在苏术精染

7、色液的时间，或用一些方法增加组织的嗜碱性，以改善细胞核的着色。图1-I}显示细胞核过染，核膜、核仁等不清晰，细胞质含有大量的苏术精，导致细胞核与细胞质比例失调。这主要是由于在染色过程中切片在苏术精染液停留过长、切片太厚、分化步骤时间太短，造成苏术精染液大量分布而占据细胞质位置。通过显微镜上卜微调观察，如果只有1}-2层细胞核层次，说明不是因为切片太厚，可经脱色、漂白、重新染色，对染色和分化时间做些适当的调整。若是由于切片太厚导致的细胞核过染，则需要重新切片。图1-F显示细胞核呈红、棕色改变。这主要由于苏术精染色液过度氧化和切片在苏术精染液染色

8、后返蓝不足。提示染色之前检查苏术精染色液的染色能力，发现氧化过度应及时更换;同时，可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水、0.200碳酸氢钠溶液等在苏术精染色后，给切片