组织切片石蜡切片过程

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1、石蜡切片过程一、石蜡包埋:1.脱水：组织水洗后便可酒精脱水，70%→80%→90%→95%→100%酒精（无水乙醇）→100%酒精，各级酒精脱水时间30-45min。（注意：80%酒精内组织可留之较久，当天如果来不及做完就可以暂时保存一晚上，次日再继续做下去。70%的酒精可作为更久的保存剂。）2.透蜡：脱水后组织：50%酒精+50%二甲苯30-45min.二甲苯（组织透明即可停止)15min.50%二甲苯+50%石蜡20-30min.纯石蜡145min.纯石蜡245min.（透腊之前做好准备工作：准

2、备腊杯，烘箱温度保持55—60℃左右，使石腊熔化，温度不宜过高，以免使组织发脆。）3.包埋：a.折好纸盒，准备小镊子、酒精灯、解剖针、冷水等。b.用温热吸管吸取石蜡注入纸盒。等待底稍微凝固，温镊子夹住样品放入盒子中央，面朝底(可以将蜡一次倒入纸盒，然后待蜡表面起膜后，用温镊子夹住样品放入蜡中，待冷却即可，整个操作过程中，切勿让蜡中起气泡)。c.两手拿着两端，入冷水一半，吹气，使表面石蜡形成移较厚腊层，然后急速全部进入冷水中3分钟。d.修正蜡块（上下两个面一定要平行并且光滑）e.固着蜡块二、切片1.切

3、片（切片时，可以在刀片以及刀片周围涂上一点甘油）2.贴片烤片（甘油蛋白=1/2甘油+1/2鸡蛋清）（在贴片时，用细吸管取一点点甘油蛋白（越少越好）于载玻片上，然后用手抹匀，手一定要干净。将切片放在载玻片（光亮面朝向下），然后滴几滴冷水使切片悬于水上。接着将载玻片放在37℃上烘烤。常见问题分析：1.切片分离不能形成蜡带：☞室温过低，蜡过硬。2.蜡带弯曲：☞蜡块口下面不平行，或蜡块不与刀刃平行所致。3.切片厚薄不一:☞切片刀或蜡块未固定紧。4.切成片后，组织与蜡块脱离：☞脱水不干净等。5.蜡片易粘在切片

4、上或蜡片萎缩：☞室温太高或蜡太软或刀的角度太小。6.切片破裂：☞浸蜡不足或浸蜡温度过高，或在脱水剂、透明剂中时间过长，引起组织发脆或有杂质，材料脱钙不完全，此种无法补救。7.蜡片上卷，切过刀口即破裂：☞刀口太钝或沾有石蜡或刀的角度过大或蜡太硬。*：包埋时，时间长会使标本变质，过短则石蜡不能透进标本。石蜡包埋过程中，注意控制温度保持在58-60℃，石蜡不能融化。三、染色二甲苯脱蜡（1）10----15分钟二甲苯脱蜡（2）10----15分钟1/2二甲苯+1/2100%酒精3-----5分钟100%酒精

5、10分钟95%酒精10分钟80%酒精10分钟70%酒精10分钟50%酒精10分钟蒸馏水洗1-------3分钟苏木精染色10-------15分钟自来水冲洗3-------5分钟或者更长伊红（曙红）复染色3-------5分钟或者1---2分钟70%酒精1-------2分钟80%酒精1------2分钟95%酒精（1）1------2分钟95%酒精（2）1-------2分钟100%酒精（1）1-------2分钟100%酒精（2）1--------2分钟二甲苯（1）5二甲苯（2）5封片