石蜡组织切片

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1、石蜡组织切片技术步骤：杀死与取材、固定、洗涤、脱水、透明、浸蜡与包埋、切片与贴片、染色、封固等。（一）杀死与取材1、动物致死的方法（1）麻醉法：乙醚或氯仿；或4%戊巴比妥做静脉注射，剂量一般按动物体重每公斤1ml；或用20%氨基酸乙酯作腹腔注射，剂量一般按动物每kg5ml。乙醚麻醉对丘脑下部神经分泌物的染色标本不利。（2）空气栓塞法：不宜用于血管标本的制作。（3）击头法：（4）断头法：（5）放血法：有利于肠系膜铺片的制作。无论何种致死法，都要求动作迅速，因为动物一旦死亡，其组织与细胞及开始自溶。2、取材注意事项：（1）速度要快，材料新鲜

2、取材后立即投入固定液中，防止组织会收缩变形，发生自溶现象。脏器的上皮组织最易变质，应争取在半小时内处理完毕。（2）组织块力求小而薄组织块的大小一般为0.5×0.5×0.2cm、1×1×0.3cm或1.5×1.5×0.3-0.5cm，最厚不能超过0.5cm。（3）切取组织应根据需要观察的部位进行选择所取组织应包括脏器或组织的重要结构或全层，同时考虑好切面方向。病理组织除切取病变部位外，还要切取病变和正常组织交界区域，以利观察分析。（4）勿使组织块受挤压切取组织，刀要锋利，动作要轻，不可来回切割，也不要挤压或牵拉组织。夹取组织时，切勿猛压。

3、（5）保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生理盐水冲洗。（6）尽量保持组织的原有形态柔嫩、薄的材料，有空气的组织（7）组织块附加标记的方法不同的组织块，要根据切片的要求和需要分瓶放入进行固定，加标签以示区别，并注明固定液、名称、来源、日期等等。（二）固定1、固定的目的（1）迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的形态与结构。（2）使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。（3）使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察。（4）使组织块硬化

4、，使在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏，并便于制作薄片。（5）使组织成分对染料有不同的亲和力，经过染色处理后易于辨认。（6）防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。2、固定的方法（1）蒸汽固定法：比较细小而薄的标本，可用锇酸或甲醇蒸气固定。（2）注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部或需要对整个动物进行固定。这时宜采用注射固定法，将固定液注入血管，经血管分枝到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。局部灌注固定全身灌注固定无论那种灌注固定，在灌注完成时，必须将组织块、器官或整个动物再放入同样的固定液中进行固

5、定。（3）小块组织固定法：取下的小块组织，立即置入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。3、固定的注意事项及影响因素u固定液的用量应充足，一般为组织块体积的10~20倍左右。瓶底垫上脱脂棉或几层滤纸更好，以便固定液能从上下左右前后渗入组织块。软组织或较大块组织可先经2～3小时固定后，再修整成小块重投入新配制的固定液内继续固定。u固定时间应根据组织的种类、性质、大小，固定液的种类、性质、渗透力的强弱而定。如：一般组织，以10％福尔马林固定24h左右，波恩(Bouin)氏固定液12至24h，卡诺氏(Carnoy)固定液1h内。适

6、当地增加温度可缩短固定时间。4、常用固定液：固定液特点：①有较强的渗透力，能迅速的渗入组织内部②不使组织过度收缩或膨胀，并能使组织内待观察的成分凝固为不溶性物质③能使组织达到一定的硬度，并获得较佳的折光率和对某种染料具有较强的亲和力。（1）单纯固定液10%福尔马林固定液：甲醛10ml蒸馏水90ml优点：透渗能力强，固定均匀，组织收缩小。缺点：但经乙醇脱水后收缩较大。酒精固定液：优点：有固定兼脱水作用，固定后可直接放入85％－95％酒精中脱水。对糖原、纤维蛋白和弹性纤维等固定效果好。缺点：但固定速度较慢，易使组织变脆。一般先用85％酒精固

7、定数小时再放入95％酒精继续固定。苦味酸固定液：优点：1、苦味酸固定的组织并不硬化，经酒精脱水后，其硬化程度增加不大。2、苦味酸有软化皮肤和溶化肌腱粘蛋白的作用，适宜制作毛皮和肌腱切片。缺点：1、固定后，细胞收缩明显，经酒精脱水和浸蜡包埋后收缩加剧，其收缩程度可达50%左右。2、固定组织不宜超过24小时，时间过长对碱性染料染色不利。固定后应即转入70%酒精中，经一定时间洗去苦味酸.重铬酸钾：PH在4.2以下时可固定染色体，使细胞质和染色质沉淀成网状，但线粒体被破坏。PH在4.2以上时，染色体被溶解，细胞质得到良好的固定，且能固定类脂，使

8、之不溶于脂溶剂，故能保存高尔基复合体及线粒体。升汞：能较好的显示细胞核。醋酸：对染色质和染色体的固定与染色都很好。但它既不能保存糖，又不能固定脂肪及类脂，因此，在固定线粒体及高尔基体时忌用高浓度醋酸。丙酮：