柘树果实抗氧化成分分析及其异黄酮Scandenolone诱导乳腺癌细胞凋亡通路研究.pdf

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1、万方数据Number：$20121711SichuanAgriculturalUniversityMaster’SDegreeDissertationStudiesonantioxidantchemicalsofthefruitsofCudraniaTricuspidataandresearchtheanti--breastcancerapoptosispathwayofScandenoloneBy：CaoChuntingDirectedbyAssociateProfessorYangYongandAssociateResearchF

2、ellowBaiWei．binMajor：AgriculturalProductsProcessingandStorageEngineeringField：FoodNutritionMay2015万方数据论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了

3、谢意。研究生签名：噶右廷≯ff年6月≥日关于论文使用授权的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。色皋论文不保密。研究生签名：导师签名：嘈右延绑旁口本论文保密，在年解密后适用本授权。(请在以上口内划“4”)vff年6月≥日o。ff年6月4日㈣5㈣2眦5㈣{18蛐眦1㈣O㈣J万方数据四川农业大学硕士学位论

4、文摘要目的：运用多种分离设备对柘果的抗氧化成分进行提取、分离、纯化，核磁和液质联用设备进行结构鉴定，得到柘果中的化合物。从细胞凋亡通路着手，分析异黄酮Scandenolone对乳腺癌细胞M231的抑制机理。通过一系列的研究，从而得到柘果的指纹图谱，进一步得到柘果的药用价值及其相应的作用机制。方法：(1)首先通过乙醇浸提柘树果实，然后进行大孔树脂和十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)分离柱柱分离，最后运用制备液相设备得到柘树果实中的抗氧化成分单体，用液质联用仪和核磁等手段进行单体结构的确定。(2)MTT检测异黄酮Scandenolone对M2

5、31细胞生长影响；原子力显微镜(atomicforcemicroscopy，AFM)观察异黄酮Scandenolone对M231细胞形态的影响；流式细胞术(flowcytometry，FCM)观察异黄酮Scandenolone对M231细胞周期的影响；FCM观察异黄酮Scandenolone对M231细胞线粒体膜电位(mitochondrialmembranepotential，MMP)的影响；荧光酶标仪检测异黄酮Scandenolone对M231细胞活性氧(reactieoxygenspecies，ROS)水平影响；Westernb

6、lot测定异黄酮Scandenolone对M23l细胞信号通路蛋白表达的影响，蛋白包括：casepase．3，P触冲，Bcl．2，Bax，Bcl—xL，Bad，(p)·p53，(p)-JNK，(p)-ERK，@)-AKT，①)一p38，GADPH。结果：(1)经过大孔树脂柱分离后，得到4部分粗提物，分别是30％．乙醇粗提物(2．89)，50％-乙醇粗提物(4．09)，75％-乙醇粗提物(3．79)，95％．乙醇粗提物(O．39)。将4部分粗提物进行抗氧化能力分析，发现75％．乙醇部分抗氧化能力最强，进一步分离纯化得到13个单体，其中4

7、个已经得到其具体结构，分别为：Arctiin，erythrivaroneA，2-(3，4一dimethoxybenzyl)-3一(3一methoxy-4·hydroxybenzyl)-9-butyrolactone，lappaolF。(2)Scandenolone可明显的抑制乳腺癌细胞M231的生长，当用20ug／mL浓度的Scandenolone作用细胞72h后，细胞几乎完全停止生长，选定3个浓度(10，12．5，15ug／m1)进行后续实验；AFM结果，Scandenolone作用细胞24h后，发现随浓度的增大，细胞形状逐渐从菱形

8、变为圆形，且细胞体积逐渐缩小，并从壁上脱落。FCM结果，引起Sub．G1凋亡峰百分数急剧增加，由低浓度组(10ug／m1)的17．9％1-_升到高浓度组(15ug／m1)万方数据四川农业大学硕士学位论文的99．3％，同对