EB病毒BARF1原型和变异型基因对鼻咽癌细胞生物学行为的影响.pdf

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1、EB病毒BARFl原型和变异型基因对鼻咽癌细胞生物学行为的影响中文摘要背景和目的：EB病毒(Epstein．Barrvirus，EBV)编码早期基因BARFl是新近确立的EBV致癌基因之一，其转化作用已在多种细胞系中得到证实。由于BARFl在多数鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)和EBV相关胃癌组织中表达，推测其可能在NPC、胃癌等上皮细胞性肿瘤的发生中发挥重要作用。我们前期在检测BARFl基因多态性时发现V29A变异型在NPC中的检出率高于健康人群。本研究旨在探讨BARFl基因对NPC细胞系肿瘤原性的影响以及BARF

2、l基因变异型对其致癌潜能的影响，为研究BARFl参与NPC的作用及机制提供依据。方法：构建BARFl基因原型(B95．8)和变异型(V29A)慢病毒表达载体，分别转染EBV阴性NPC细胞系CNE，杀稻瘟菌素筛选，RT-PCR和qRT-PCR鉴定目的基因表达获得BARFl原型和变异型基因稳定转染细胞。以对照病毒转染细胞为对照，进行MTT实验、细胞周期检测、平板克隆形成实验、凋亡诱导实验和细胞迁移实验，检测BARFl原型和变异型基因对CNE细胞生物学行为的影响。结果：(1)成功构建BARFl基因原型和变异型基因稳定转染细胞，2种基因在EBV阴性NPC细

3、胞系中均能有效表达。(2)细胞增殖实验：BARFl原型和变异型基因转染细胞及对照病毒转染细胞MTT吸光度值、平板克隆形成率和细胞周期细胞增殖指数均无显著性差异(P均大于O．05)。(3)凋亡诱导实验：顺铂(299／m1)诱导48h，感染BARFl原型和变异型慢病毒细胞的存活率均高于对照病毒感染细胞，差异有显著性(P均小于0．05)，而细胞凋亡率低于对照病毒感染细胞，差异有显著性(P均小于0．05)，变异型与原型之间细胞存活率和凋亡率均无显著性差异(P均大于0．05)。(4)细胞迁移实验：BARFl原型和变异型慢病毒感染细胞的迁移能力高于对照病毒感染

4、细胞，差异有显著性(氏0．05)，变异型与原型之间细胞迁移无显著性差异(尸>0．05)。结论：(1)BARFl基因对EBV阴性NPC细胞系CNE无明显促增殖作用，但可提高其抗凋亡能力和迁移能力，从而增强CNE细胞肿瘤原性，在NPC发生发展过程中可能起重要作用。(2)BARFlV29A变异型对BARFl致癌潜能无明显影响。硕士研究生：杨颖(病原生物学)指导老师：罗兵教授关键词：EB病毒；BARFl；鼻咽癌；细胞生物学行为EffectsofEpstein--Barrvirus-·encodedBARFlgeneanditsvariantonthebio

5、logicalbehaviorsofnasopharyngealAbstractcarcinomacellfIlllIIIIIIHHIIIlllHllllIIIY2589170Backgroundandobjective：TheEpstein-Barrvirus(EBV)-encodedBARF1geneisconsideredasoneofthevirusoncogeneanditstransformationrolehasbeendemonstratedinvariouscelllines．BARF1isfrequentlyexpressedi

6、nnasopharyngealcarcinoma(NPC)andEBV-associatedgastriccarcinomatissues，indicatingthatBARF1genemayplayanimportantroleinepithelialcelltumorigenesissuchasNPCandEBV-associatedgastriccarcinoma．Inourpreviousstudy,avariantofBARF1(V29A)wasidentifiedinNorthernChina，whichshowedarelativel

7、yhigher台equencyinNPCthanhealthydonors．ThisstudyaimstoinvestigatetheoncogenicfunctionsofBARF1anditsvariantinEBV-negativeNPCcelllines．Methods：ThelentivimsvectorwhichexpressedBARF1prototypegene(pLenti6．3-B95—8)orBARFlvariantgene(pLenti6．3一V29A)wasconstructedandtransfectedintoEBV-

8、negativeNPCcelllineCNE，respectively．AfterscreenedbyBlasticidi