慢病毒介导rabex-5基因沉默对乳腺癌细胞生物学行为的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文慢病毒介导Rabex--5基因沉默对乳腺癌细胞生物学行为的影响姓名：闵捷申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：励红元201205重庆医科大学硕士研究生学位论文慢病毒介导Rabex-5基因沉默对乳腺癌细胞生物学行为的影响摘要目的：构建Rabex-5RNAi慢病毒表达载体，感染人乳腺癌细胞株MCF一7，观察其对Rabex-5基因的沉默效应。明确干扰Rabex一5表达后对MCF-7细胞生物学行为的影响。初步探讨慢病毒介导RNAi沉默Rabex-5基因在乳腺癌基因治疗中的应用前景，以开辟乳腺癌治疗的新途径。方法：将设计合成的单

2、链引物退火成双链oligo序列，连接入经AgeI和EcoRI双酶切线性他的pMAGic慢病毒质粒载体中，经转化DH5Q感受态细胞并筛选出阳性克隧。测序鉴定。用293FT细胞包装产生慢病毒，感染MCF一7细胞，Real-t．imePCR和Westernblotting鉴定抑制Rabex-5表达的效果。利用CCK-8法和Transwell小室法检测shRNh对MCF-7细胞增殖和侵袭迁移能力的影响。结果：PCR与测序鉴定证实成功构建了Rabex-5RNAi的慢病毒载体，转染MCF一7细胞后，与未干扰组和阴性对照组相比，Rabex-5的mRNA和蛋白

3、表达下调，以RNAi3的沉默效应最佳。下调MCF-7细胞内Rabex-5表达可抑制乳腺癌MCF-7细胞的侵袭迁移能力(P

4、LENCINGRABE)(-5E)Ⅱ’RESSIONBYLENTIVIRAL—MEDIATEDRNAINTERFERENCEoNTHEBIOLOGICALBEHAVIOR0FBREASTCANCERCELLLINESABSTRACTObjective：ToconstructalentiviralvectorforRNAinterference(RNAi)ofRabex-5geneandtodetectitssilenceeffectonRabex．5inMCF一7cellsanditsimpactsonbiologicalbehaviorsaf

5、terinterference．Theaimofthepresentstudyistoexploretheprospectsoflentivirus．mediated’'一●一一-·●．silencingRabex-5applicationmgenetherapyforbreastcancerinordertoprovideanewtreatmentforbreastcancer．Methods．Thesynthesisedsingle—strandedprimerwasannealedtodouble。strandedoligosequenc

6、esandsub-clonedintolinearpMAGiclentivimlplasmidvectordigestedbyenzymeAgeIandEcoRI．DH5Qcompetentcellsweretransformedandthepositiveclonewerescreened，identifiedandsequenced．Therecombinantlentiviruswaspackagedintothematurelentivirusby293FTcellsandusedtoinfectMCF．7cells．Theexpres

7、sionofRabex-5inthecellswasdetectedbyreal—timePCRandWesternblot．Theeffectsofrecombinantlentivirusoncellproliferation，invasionandmigrationabilitywereanalyzedbyCCK-8methodand’砌nswellchambertest。5重庆医科大学硕士研究生学位论文Results：PCRandsequencingverifiedthattherecombinantlentivirusplasmidR

8、abex5一shRNAwassuccessfullyconstructed．Comparedwiththenegativecontrolandtheb