慢病毒载体介导siRNA沉默大鼠海马Glol基因对空间学习记忆的影响

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1、山东师范大学硕士学位论文6英语缩写英文全称符号说明中文名称AGEsadcallcedglycationendproducts高度糖化终产物CMVCytomegaloVims巨细胞病毒DAPI4，’6-diamdin0—2-phenylind01e4，’6二脒基．2．苯基吲哚DMEMDulbecco’smodinedEaglemediaDulbecco培养基E．cD矗Escherichia∞疗大肠杆菌EBEthidimbr0面de溴化乙锭EDTAEditicacid乙二胺四乙酸EGFPenhancedgreenfluorescentprotein增强绿色荧光蛋白FBSFe

2、talbovinesen】mG101Glyoxalase1GSH91utamioneHEPES胎牛血清乙二醛还原酶1谷胱甘肽2．[4一(2一Hydroxye廿1y1)一1一piperaZine]ema4．羟乙基哌嗪乙磺酸nesulI．onicacidHⅣIhum趾iImnullodeficiencyvims1人类免疫缺陷病毒I型hp53humanp53丘．om血ehum锄H1一对叮A源于H1一RN启动子的promoter人类p53基因L17Rslongte肋inalr印eats长末端重复序列山东师范大学硕士学位论文LVlentiviralvectorMGMethyl91

3、yoxalMIⅣmouseleukemia啊rusOD0pticaldens时PBSPhosphatebu虢redsaline慢病毒载体甲基乙二醛双嗜性小鼠白血病病生母光密度磷酸盐缓冲液PEG-6000P01yethyleneG1yc01-6000聚乙二醇一6000I冲MroundperminutesiRNAsiGl01sihp53每分钟转速小干涉砒临lentiViralvectorseXpresssiRNAagainst表达siRNA沉默G101G101基因的慢病毒载体1emiviralvectorsexpresssiI心渔agamst表达siRNA沉默hp53hp5

4、3基因的慢病毒载体SⅣSelfdeactivationVSVvesicularstomatitisvillls自身失活水疱性口炎病毒7独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得——(注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空)或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学僦文作者魏多薄屯，新签字学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解堂撞有关保留、使用学

5、位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权堂撞可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：弓苷屯签字日期：200》年名月占日导师签字：签字日期：2。。驴年彭月7日山东师范大学硕士学位论文慢病毒载体介导siRNA沉默大鼠海马G10l基因对空间学习记忆的影响中文摘要目的：乙二醛还原酶I(GlyoxalaseI，简称G101)是乙二醛途经的一个重要部分，广泛存在于所有细胞质中，能催化多种带芳香基和脂肪基

6、团的a一羰基醛向a一羟基硫脂转化。乙二醛酶I的主要生理作用是与乙二醛酶II协同将具有细胞毒性的甲基乙二醛转化为无毒的D．乳酸。脑组织中G101表达和活性水平的下降可能是导致阿兹海默病患者神经元蜕变的分子机制之一。G101基因还被认为与许多神经性疾病有关。病毒载体是目前转移基因的最优手段，其中慢病毒载体技术和腺病毒载体技术是最成熟的。慢病毒载体可以转染大部分已分化或未分化细胞并表达小干涉RNA(Shoftimerference砌叮A，sjRNA)，其中包括终末分化的神经元。本研究采用三质粒系统在293T细胞(人胚胎肾上皮细胞293细胞系派生)中包装合成siGlol重组慢病

7、毒载体，并用慢病毒载体在体转染大鼠双侧海马脑区。Mo玎is水迷宫是用于评估与啮齿类动物海马功能直接相关的空间学习记忆的重要工具，本研究采用隐蔽站台，动物通过其空间定位能力来确定站台位置，反映了脑内的空间参考记忆水平。通过比较定位航行实验的逃避潜伏期可以获取动物提取空间信息和学习能力的数据，而空间探索实验可以判断动物记忆储存能力及提取再现能力。本实验主要研究转染后G101基因沉默对大鼠空间学习记忆能力的影响，为进一步建立慢病毒载体介导动物体内特定部位实现I蝌A过表达或鼬姐干扰奠定基础，并为电生理膜片钳研究提供新的动物模型，同时为基因治疗的应