eb病毒早期基因barf1和bhrf1启动子甲基化状态与表达的研究

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1、EB病毒早期基因B舢Ⅻl和BHRFl启动子甲基化状态与表达的研究中文摘要EB病毒(Epstein．Barrvirus，EBV)属人类疱疹病毒科Y疱疹病毒亚科成员，是重要的DNA病毒，具有致癌潜能。体内主要感染B淋巴细胞和某些上皮细胞，可导致B细胞源性肿瘤或上皮细胞源性肿瘤。EBV相关胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma，EBVaGC)及鼻咽癌组织中病毒基因表现为限制性表达，可能与表观遗传机制调控病毒基因启动子，尤其是其甲基化状态来调控病毒基因的表达有关。目的探讨EBV早期基因BARFl启动子

2、Ap和BHRFl启动子Hp甲基化状态及其对转录表达的影响，为进一步研究BARFl和BHRFl基因在EBV相关肿瘤发生中的作用机制提供实验基础。方法选取EBV阳性细胞系(GT38，B95．8，GT39，Raji，PZC666—1，0B，SNU719)和EBVaGC作为研究对象，采用5．氮杂．2’．脱氧胞苷(5．Aza—CdR)处理EBV阳性细胞系(GT38，B95．8，GT39，Raji)，甲基化特异性PCR(Methylation-SpecificPCR，MSP)以及亚硫酸氢盐基因组测序法(Bisulfitegenomi

3、csequencing，BGS)检测EBVaGC组织以及5-mza．CdR处理前后EBV阳性细胞系中BARFl和BHRFl基因启动子Ap和Hp甲基化状态。同时采用实时荧光定量PCR(Real．timequantitativePCR，qRT-PCR)检测5-Aza．CdR处理前后BARFl和BHRFl基因的转录表达情况。结果@MSP检测结果显示在EBV阳性细胞系中BARFl和BHI强1基因启动子Ap和Hp均存在不同程度的甲基化，在GT38，GT39，PT,C666．1和Raji细胞系呈完全甲基化，为M型；而在SNU719，

4、B95．8和OB细胞系发生不完全甲基化，呈M+U型。@BGS检测结果显示，MSP产物电泳为M型的EBVIj日性细胞系3种EBV早期基因启动子区几乎所有CpG位点均发生甲基化，而MSP产物电泳呈M+U型的EBV阳性细胞系1种EBV早期基因启动子区则表现为部分CpG位点的甲基化。@MSP结果显示EBVaGCs癌组织中BARFl基因启动子有31例为M型(31／43，72．1％)，M+U型12例(12／43，27．9％)；BHRFl基因启动子有36例呈M型(36／43，83．7％)，M+U型7例(7／43，16．3％)，表明2种

5、早期基因的启动子均呈高甲基化状态。@MSP和BGS检测结果均显示EBV阳性细胞系B95．8，GT38和GT39在5-Aza．CdR处理后BARFl和BHRFl基因启动子甲基化程度降低。⑤去甲基化试剂5-Aza．CdR处理B95．8，Raji，GT38和GT39细胞系可使EBV早期基因基因BARFl和BHRFl的转录表达水平升高，其中BARFl基因在B95．8，Raji，GT38和GT39细胞系处理后表达水平分别为处理前的2．13，6．50，73．53和2．50倍，BHRFl基因在B95．8，Raji，GT38和GT39细

6、胞系处理l吣雌唧眦眦呲哪吣删唧1V2589171后表达水平分别为处理前的3．39，2．46，6．45和16．67倍。结论@BHRFl基因的转录表达与其启动子甲基化程度密切相关，而BARFl基因的转录表达可能部分受其启动子甲基化的调控，因此甲基化是调控EBV主要早期基因启动子活动的重要机制之一。@EBV早期基因BARFl和BHRFl的甲基化状态和转录表达有一定关联性，表现为不同类型EBV阳性细胞系BARFl基因启动子Ap和BHRFl基因启动子Hp甲基化程度和转录表达有所不同：而在同一种细胞系，Ap和Hp甲基化程度以及BAR

7、Fl和BHRFl基因的转录表达水平相似。③EBVaGC组织中BARFl矛IJBHRFl基因启动子呈高甲基化状态，推测甲基化可调控EBVaGC组织中两种基因的表达，使EBV处于潜伏期状态，进而逃避宿主的免疫监视，维持病毒的持续感染状态，在EBVaGC的发生发展中发挥一定作用。硕士研究生车奎(病原生物学)指导导师罗兵教授关键词：EB病毒；胃癌；甲基化；启动子StudyofmethylationstatusonBARFlandBHRFlgenespromoterandexpressioninEpstein--Barrvirus

8、--associatedgastriccarcinomaAbstractEpstein-Barrvirus(EBV)isanimportantDNAvirusoftheT-herpesvirusfamilythatisubiquitousinhumanpopulation，whichhascloserelations