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时间:2020-03-18
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1、EB病毒相关胃癌组织及胃癌细胞系中LOxLl基因甲基化状态与表达的研究摘要EB病毒(Epstein.Barrvirus,EBV)是公认的DNA致瘤病毒,现己确认EBV感染与部分胃癌发生密切相关,但发病机制有待进一步研究。EBV感染可诱导相关抑癌基因启动子区呈高甲基化状态,这被认为是引起EBV相关肿瘤抑制基因功能失活的重要机制之一。目的检测并比较分析部分胃癌细胞系及EBV相关胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma,EBVaGC)和EBV阴性胃癌(EBV-negativedgastriccarcinoma,EBVnGC)组织中LOXLl基因甲基化状态及其转录表达,探
2、讨EBV感染对LOXLl基因启动子区甲基化状态及其转录表达的影响,为进一步研究LOXLl基因在EBVaGC发生中的作用机制提供实验基础。方法采用甲基化特异性PCR(Methylation—SpecificPCR,MSP)和亚硫酸氢盐基因组测序法(Bisulfitegenomicsequencing,BGS)检测EBV阴性5fnISH性胃癌细胞系以及EBVaGC和EBVnGC组织中LOXLl基因启动子区的甲基化状态。用5.氮杂.2’.脱氧胞苷(5.Aza—CdR)对EBV阳性胃癌细胞系进行去甲基化处理,MSP及BGS检测LOXLl基因启动子区甲基化状态的变化。采用实时荧光定量PCR(Real
3、.timequantitativePCR,Real.timeqPCR)检测比较EBV阴性胃癌细胞系、EBV阳性胃癌细胞系之间以及5-Aza.CdR作用前后EBV阳性胃癌细胞系之间LOXLl基因转录表达水平的差异。结果①胃癌细胞系MSP结果显示:3种EBV阳性胃癌细胞系SNU719,GT38,GT39和4种EBV阴性胃癌细胞系MKN.45,SGC7901,HGC.27,BGC.823中LOXLl基因启动子区均呈M+u型。②胃癌细胞系BGS结果显示:3种EBV阳性胃癌细胞系中LOXLl基因启动子区有大多数CpG位点呈现甲基化状态,EBV阴性胃癌细胞系中未发现甲基化位点,EBV阳性胃癌细胞系甲基
4、化程度明显高于EBV阴性胃癌细胞系。③胃癌组织MSP结果显示:EBVaGC和EBVnGC组织中LOXLl基因启动子区也均表现为M+U型,但EBVaGC组织中LOXLl基因启动子的甲基化程度较EBVnGC组织高。④部分胃癌组织BGS测序结果显示:不同胃癌组织标本中LOXLl基因启动子区的20个CpG位点呈现不同的甲基化状态,甲基化程度存在一定的差异;其中EBVaGC组织中LOXLl基因启动子区有更多的CpG位点呈现甲基化状态,总体甲基化程度高于EBVnGC组织。⑤5.Aza.CdR处理后EBV阳性胃癌细胞系MSP及BGS结果显示:LOXLl基因启动子区甲基化程度降低。@Real.timeqP
5、CR结果显示:通过比较差异倍数2-AAu,EBV阳性胃癌细胞系和EBV阴性胃癌细胞系间LOXLl基因的转录表达水平存在一定的差异,EBV阴性胃癌细胞系LOXLl基因转录表达水平为EBV阳性胃癌细胞系的4.35倍;5-Aza.CdR去甲基化处理后EBV阳性胃癌细胞系中LOXLl基因转录表达水平比处理前有2.33倍的升高。结论EBV阳性胃癌细胞系及EBVaGC组织中存在LOXLl基因启动子区的异常甲基化,EBV感染可诱导LOXLl基因启动子区的高甲基化状态,并通过高甲基化下调细胞中LOXLl基因的转录表达,进而在EBV相关肿瘤的发生发展中发挥一定作用。硕士研究生:SE海娟(临床检验诊断学)指导
6、导师:李慧教授关键词:EB病毒;胃癌细胞系;EBV相关胃癌;DNA甲基化;LOXLl基因;5-Aza.CdRStudyofmethylationstatusandexpressionononLOXL1geneinEpstein-Barrvirus—associatedgastriccarcinomatiussesandgastriccarcinomacelllinesAbstractEpstein-Barrvirus(EBV)isknownasanimportantDNAtumorvirus.EBVinfectionISrelatedtogastriccarcinoma,butpathog
7、enicmechanismofthatisnotwellunderstood.MethylationoftumorsuppressorgeneinducedbyEBVinfectionisknownasanimportantmechanismforthescilenceoftumorsuppressorgene.ObjectiveThestudyaimedtoexploretheinfluenceofEBVinfecti
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