EB病毒相关胃癌病毒基因多态性的研究

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1、EB病毒相关胃癌病毒基因多态性的研究中文摘要目的分析我国鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)非高发区EB病毒相关胃癌(Epstein．BarrVirusassociatedgastriccarcinoma，EBVaGC)组织中EBV分型及多种基因的多态性，确定是否存在与EBVaGC相关的EBV基因变异，深入探讨我国EBV基因型在人群中的分布以及EBV在胃癌发生发展中的作用。方法①收集山东地区362例新鲜胃癌组织及639例石蜡包埋胃癌组织，应用PCR．Southern杂交检测其特异性EBVDNA，进一步用原位杂交技术检测PCR阳性标本石蜡切片组织中EBV编码的小RNA

2、(EBVeneodingsmallRNA，EBER)1的表达，以确证EBVaGC。以PCR—Southern杂交检测260例健康人咽漱液(throatwashings，TWs)，筛选EBVB日性标本以做EB病毒相关胃癌病毒基因多态性研究的对照。②采用PCR．RFLP、巢式PCR及DNA测序等方法，检测EBV阳性标本病毒1／2分型、F／f分型、矾分型及LMPlXhoI(+)／(．)等4种基因变异，比较各组间EBV分型异同。③巢式PCR及DNA测序法对潜伏膜蛋白(1atentmembraneprotein)LMPl和LMP2A编码基因，以及裂解期基因BARFl和BHRFI的多态性进行全面检测，并参

3、照B95．8标准株序列，应用DNASTAR软件对所得序列进行比对分析，同时与已发表文献中EBV基因多态性检测结果比对分析，以寻找EBVaGC及健康Tws中上述病毒基因变异规律，探讨是否存在与EBVaGC相关的EBV基因变异。结果①1001例胃癌组织中有63例为EBVaGC(6．29％)，而健康TWs中EBV阳性率为23．08％(60／260)。(至)EBVaGCs和EBV阴性胃癌(EBV-negativegastriccarcinoma，EBVnGC)在年龄、发病部位及病理类型的差异有显著性，EBVaGCs在<60岁人群的感染率高于≥60岁人群的感染率(#=11．581，P=0．0007)，胃

4、底贲f-J并n胃体发生率高于胃窦发生率(f=-4．684，P=-0．030)，且病理类型以低分化腺癌多见(f=19．797，P=-0．0005)。残胃癌EBV感染率高达33．33％。此外，EBVaGCs和EBVnGC在性别和淋巴结转移的差异均无显著性。⑨EBVaGC中i型及XhoI(．)型EBV的比率高于健康人，差异有显著性；而1／2分型，F／f分型在EBVaGC和健康人群中的分布无差异。i／XhoI(．)亚型在EBVaGC中的比率(77．6％)高于健康人(52．6％)，差异有显著性(f=7．115，P=0．008)。④据LMPl特征性突变分型，23例EBVaGC病毒株中，有22例出现Chin

5、al型EBV特征性点突变，其中19株为Chinal型EBV。29例Tws株中，则有18例为Chinal型，该型EBV在两组间的差别无统计学意义。另外，Tws中尚有6例为Med．型，1例为China2型，l例为NC型，其余3例标本则具有不同型别的突变特点。分别有19例EBVaGC及22例TWs呈30bp(168294nt．168265nt，AA343．352)缺失，两者之间30bp缺失率差异无统计学意义。21株EBVaGC发生AA326E—O突变，而Tws中仅有7株，EBVaGC此位点突变率远高于健康对照。⑤与EBVB95—8毒株比较发现，EBVaGC及健康对照Tws标本LMP2A基因共出现30

6、处错义突变，并导致9处CTL表位变异，其中4处表位的变异情况为首次报道；4处突变为所有标本共有。外显子l与外显子2．8变异不同步：外显子1各变异类型在EBVaGC及健康对照中分布频率无显著性差异；而外显子2．8中主要变异类型Groupl出现频率在EBVaGC和1ws中的分布有显著性差异；氨基末端主要功能区在所有标本中均严格保守。⑥除BHRFl基因编码区内1处突变(AA88L—V)在多株标本出现外，各标本病毒裂解期基因BARFl及BHRFl未发现一致序列变异，仅有的少数变异呈散在分布。与B95．8标准株序列相比，各标本BARFl序列同源性均耋98．9％，而BHRFl同源性均耋99．1％。EBVa

7、GC及健康人稚ws标本间两基因均无明显差异。BHRFl基因变异多分布于现已确认的bcl-2同源结构域外。结论@EBV感染与部分胃癌的发生有关，且EBVaGC具有独特I临床病理特征。②本研究初步证实i／XhoI(．)型EBV是与山东地区EBVaGC相关的变异型。③首次证实以LMPl基因变异分类的Chinal型为山东地区EBVaGC和健康人群中的优势病毒亚型。AA326E—Q突变可能与胃癌发生相关。④