eb病毒对wif1基因甲基化和表达影响的研究

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1、分类号：R373密级：不保密UDC：610学校代码：11065硕士学位论文EB病毒对WIF1基因甲基化和表达影响的研究赵真真指导教师罗兵教授学科专业名称病原生物学论文答辩日期2015年6月2日EB病毒对WIF1基因甲基化和表达影响的研究中文摘要EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)为嗜淋巴细胞病毒属的DNA肿瘤病毒，EBV感染与部分胃癌发生的关系已经确认，EBV相关胃癌(EBV-associatedgastriccarcinoma,EBVaGC)约占胃癌总数的10%。EBVaGC发生的表观遗传学机制的研究主要涉及EBV

2、感染对抑癌基因启动子区甲基化的影响，以及EBV非编码RNA对宿主基因表达调控作用两个方面。目的明确EBV感染对Wnt抑制因子1(Wntinhibitoryfactor-1,WIF1)编码基因启动子区甲基化以及EBV编码miRNABART19-3p对WIF1表达的影响，为进一步探讨EBV抑制WIF1表达，进而异常激活Wnt原癌基因通路参与EBVaGC发生发展的作用机制提供实验基础。方法选取2种EBV阳性胃癌细胞系GT38、GT39和3种EBV阴性胃癌细胞系HGC-27、MKN-45、SGC7901作为研究对象，采用实时荧光定量PCR(R

3、ealtimequantitativePCR,realtimeqPCR)检测上述细胞系WIF1表达水平，亚硫酸氢盐基因组测序法(Bisufitegenomicsequencing,BGS)检测WIF1基因启动子区甲基化状态。并分别采用5-Aza-CdR、BART19-3p模拟物以及抑制物作用EBV阳性胃癌细胞系GT38和EBV阴性胃癌细胞系HGC-27，检测药物作用前后2种细胞系WIF1和β-catentin表达水平的变化以及细胞增殖情况。结果①BGS检测结果结果显示，5种胃癌细胞系WIF1启动子区均呈高甲基化状态，甲基化率均在85%

4、以上。②realtimeqPCR结果显示，胃癌细胞系中WIF1表达普遍下调，以EBV阳性细胞系GT38和GT39下降更为明显；5-Aza-CdR作用后GT38和HGC-27两种细胞系WIF1表达均上调，其中HGC-27上调更为显著；同时，WesternBlot显示两种细胞系β-catenin水平均下调。③EBV阴性细胞系HGC-27转染外源性BART19-3p模拟物后，WIF1表达进一步下调，β-catenin水平升高，细胞增殖率增加。④EBV阳性细胞GT38转染外源性BART19-3p抑制物后，WIF1表达水平升高，β-cateni

5、n表达水平下调，细胞生长抑制率增加。结论①EBV阴性和阳性细胞系中WIF1表达水平均较低，EBV阳性细胞系中表达缺失或下调情况更为明显，去甲基化试剂5-Aza-CdR处理可不同程度上调GT38及HGC-27细胞系WIF1表达，EBV阴性细胞系HGC-27上调更为明显。②外源性BART19-3p模拟物转染EBV阴性细胞系HGC-27可进一步抑制WIF1表达，抑制β-Catenin降解，促进其积聚。提示BART19-3p可拮抗WIF1对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用，进而在EBV相关肿瘤的发生发展中发挥作用。③外源性BART

6、19-3p抑制物转染EBV阳性细胞系GT38可抑制EBV编码的BART19-3p的作1用，WIF1表达上调，从而抑制β-catenin的积聚，进一步证明BART19-3p对WIF1的抑制作用。④尽管普遍认为EBV对宿主表观遗传学的影响主要为抑癌基因启动子区甲基化，但就WIF1而言，其编码miRNAs可能发挥主要作用。硕士研究生：赵真真(病原生物学)指导教师：罗兵教授关键词：Wnt通路抑制因子1；EB病毒；微小RNA；甲基化；胃癌2TheeffectofEBVonWIF1genemethylationandexpressioningas

7、triccarcinomaAbstractEpstein-Barr(EBV)isanimportantDNAtumorvirus.EBV-associatedgastriccarcinoma(EBVaGC)comprisesupto10%oftotalgastriccarcinomacases.DNAmethylationandmicroRNA(miRNA)arethemoststudiedepigeneticmechanisms.ObjectiveThisstudyaimedtodetecttheeffectofEBVonWIF1g

8、enemethylationandexpressioningastriccarcinoma.MehodsWIF1mRNAexpressionlevelwasdetectedbyreal-timequantitativeR